Prevalência e identificação morfofisiológica e molecular de Malassezia spp. em aves de um centro de reabilitação de animais selvagens

Abstract

Os psitacídeos são a família de aves com o maior número de espécies ameaçadas de extinção devido à ampla comercialização ilegal no Brasil. Os animais provenientes de tráfico estão sujeitos a condições insalubres que podem levar a distúrbios imunológicos e ao desenvolvimento de infecções primárias e secundárias que podem ter potencial zoonótico, tornando-se assim de relevância para a saúde pública. Diferentes espécies de Malassezia têm sido detectadas em cães, gatos, cavalos, bovinos, ovinos, camelos e até mesmo em aves aquáticas. Em aves, espécies de Malassezia já foram isoladas de diferentes sítios anatômicos como pele, crista, canto de olho e garganta, assim como em fezes. Duas espécies novas foram descritas em papagaios, em 2016 no Brasil, M. brasiliensis e M. psittaci, no entanto, há poucos estudos relatando a taxa de ocorrência de Malassezia em diferentes espécies de aves e mais pesquisas ainda são necessárias. Foram avaliados exemplares de psitacídeos alojados em ambiente de cativeiro no Centro de Medicina e Pesquisa em Animais Selvagens, FMVZ/UNESP-Botucatu. Após contenção física dos animais, swabs de diferentes sítios anatômicos de 32 aves foram coletados e cultivados em ágar Sabouraud adicionado de 1% de azeite de oliva e cloranfenicol (50 μg/mL). As colônias leveduriformes suspeitas foram isoladas em tubos contendo o mesmo meio de cultura para a identificação morfofisiológica clássica e por técnicas moleculares. A reação em cadeia polimerase (Nested PCR) a partir da região gênica D1/D2 das colônias suspeitas obtidas mostrou amplificação de bandas e o sequenciamento a partir das colônias não detectou Malassezia spp., mas mostrou outras leveduras morfologicamente parecidas como Hanseniaspora spp., Meyerozyma spp., Candida spp., Debaryomyces hansenii e Wickerhamomyces anomalus. Um primer específico foi desenhado para a detecção 16 espécies de Malassezia e o resultado foi positivo para a cepa controle de Malassezia pachydermatis, no entanto diferentes espécies de levedura previamente identificadas também foram amplificadas. Os resultados aqui obtidos poderão auxiliar em futuros diagnósticos, bem como enriquecer o conhecimento da área.

Psittacidae are the family of birds with the largest number of species threatened with extinction due to widespread illegal trade in Brazil. Animals from trafficking are subject to unsanitary conditions that can lead to immunological disorders and the development of primary and secondary infections that may have zoonotic potential, thus becoming relevant to public health. Different species of Malassezia have been detected in dogs, cats, horses, cattle, sheep, camels and even waterfowl. In birds, Malassezia species have been isolated from different anatomical sites such as the skin, crest, corner of the eye and throat, as well as in feces. Two new species were described in parrots in 2016 in Brazil, M. brasiliensis and M. psittaci, however, there are few studies reporting the occurrence rate of Malassezia in different species of birds and more research is still needed. Parrot specimens housed in a captive environment at the Center for Medicine and Research in Wild Animals, FMVZ/UNESP-Botucatu, were evaluated. After physical containment of the animals, swabs from different anatomical sites of 32 birds were collected and cultured in Sabouraud agar added with 1% olive oil and chloramphenicol (50 µg/mL). Suspicious yeast colonies were isolated in tubes containing the same culture medium for classical morphophysiological identification and molecular techniques. The polymerase chain reaction (Nested PCR) from the D1/D2 gene region of the suspected colonies obtained showed amplification of bands and the sequencing from the colonies did not detect Malassezia spp., but showed other morphologically similar yeasts such as Hanseniaspora spp., Meyerozyma spp., Candida spp., Debaryomyces hansenii and Wickerhamomyces anomalus. A specific primer for 16 Malassezia species was designed and the result was positive for the control strain of Malassezia pachydermatis, however different previously identified yeast species were also amplified. The results obtained here may assist in future diagnoses, as well as enrich knowledge in the area.