Avaliação in vitro da via inflamatória do NF-κB em células amnióticas epiteliais na presença de estímulo polimicrobiano

Abstract

Introdução: O Trabalho de Parto Pré-Termo (TPP) e a Rotura Prematura de Membranas (RPM-PT) acarretam altas taxas de morbidade e mortalidade neonatais. Nestas síndromes inflamatórias há produção exacerbada de espécies reativas de oxigênio (EROs), o que leva ao dano oxidativo e à senescência das membranas fetais. Nesse contexto, a principal via intracelular induzida é o fator nuclear-κB (NF-κB). As células amnióticas que compõe as membranas fetais são importantes fontes de citocinas pró-inflamatórias, quimiocinas e ácido araquidônico, que juntos se apresentam como componentes importantes para o início do trabalho de parto. Embora a via inflamatória do NF-кB seja de grande relevância para o desfecho gestacional, a literatura carece de informações associando essa via inflamatória na presença de cenário de infecção amniótica e como a expressão de NF-κB pode estar associada no TPP e na RPM-PT. Objetivo: Avaliar a via inflamatória do NF-кB e suas subunidades em cultura de células amnióticas epiteliais imortalizadas (hFM-AECs) no cenário de infecção polibacteriana. Metodologia: Células amnióticas epiteliais imortalizadas foram desafiadas com diferentes espécies bacterianas. Culturas celulares sem estímulo foram usadas como controle negativo e, como controle positivo, foi utilizado lipopolissacarídeo de Escherichia coli. As células cultivadas e desafiadas com as cepas ATCC foram submetidas à extração de RNA total e o cDNA foi obtido utilizando-se o High Capacity. A expressão gênica da subunidade do NF-кB, Rel-A (p65) foi avaliada por PCR em tempo real utilizando-se Sybr Green. Resultado: A expressão gênica da subunidade p65 não apresentou correlação com o processo infeccioso e inflamatório provocado por estímulos bacterianos. Conclusão: Os resultados aqui apresentados ainda são preliminares e a investigação de outras moléculas envolvidas nesta via, além da determinação da expressão proteica das moléculas efetoras é essencial para melhor compreensão dos mecanismos implicados na infecção polimicrobiana associada à prematuridade.

Introduction: Preterm Labor (TPP) and Premature Rupture of Membranes (PRM-PT) lead to high rates of neonatal morbidity and mortality. In these inflammatory syndromes, there is an exacerbated production of reactive oxygen species (ROS), which leads to oxidative damage and senescence of fetal membranes. In this context, the main intracellular pathway induced is nuclear factor-κB (NF-κB). The amniotic cells that make up fetal membranes are important sources of pro-inflammatory cytokines, chemokines and arachidonic acid, which together are important components for the initiation of labor. Although the NF-κB inflammatory pathway is of great relevance for gestational outcome, the literature lacks information associating this inflammatory pathway in the presence of amniotic infection and how NF-κB expression may be associated with PPT and RPM- PT. Objective: To evaluate the inflammatory pathway of NF-кB and its subunits in cultured immortalized amniotic epithelial cells (hFM-AECs) in the setting of polybacterial infection. Methodology: Immortalized amniotic epithelial cells were challenged with different bacterial species. Cell cultures without stimulation were used as a negative control and, as a positive control, lipopolysaccharide from Escherichia coli was used. Cells cultured and challenged with ATCC strains were subjected to total RNA extraction and cDNA was obtained using High Capacity. Gene expression of the NF-кB subunit, Rel-A (p65) was evaluated by real-time PCR using Sybr Green. Result: The gene expression of the p65 subunit did not show any correlation with the infectious and inflammatory process caused by bacterial stimuli. Conclusion: The results presented here are still preliminary and the investigation of other molecules involved in this pathway, in addition to determining the protein expression of effector molecules, is essential for a better understanding of the mechanisms involved in polymicrobial infection associated with prematurity.