Imobilização da enzima invertase de Saccharomyces cerevisiae em pó de sabugo de milho para produção de açúcar invertido
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Data
Orientador
Monti, Rubens
Bassan, Juliana Cristina
Coorientador
Pós-graduação
Curso de graduação
Farmácia - FCF
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
O objetivo do estudo foi identificar o melhor método físico de extração da invertase de Saccharomyces cerevisiae e analisar uma alternativa de protocolo de ativação do pó de sabugo de milho para imobilização da enzima. A levedura foi submetida a seis tratamentos físicos de rompimento: (1) congelamento, (2) congelamento com água, (3) ultrassom, (4) agitação na presença de abrasivos, (5) maceração sem solventes orgânicos e (6) maceração com éter. O extrato do melhor método foi parcialmente purificado. O pó de sabugo de milho foi ativado (1) com a formação de grupos glioxil, amino e glutaraldeído subsequentes, um método descrito por Guisán (2016) e (2) com oxidação direta, formação de grupos amino e glutaraldeído, também subsequentes, sendo este o método proposto para ativação. Os derivados suporte-enzima foram analisados quanto a sua atividade enzimática, atividade recuperada e eficiência de recuperação. Dos seis tratamentos de extração da invertase estudados, o método escolhido como melhor foi o congelamento puro, que após purificação parcial resultou em extrato com 2,98 ± 0,7 U. mL-1. Após purificação final, a enzima livre apresentou 3,54 ± 0,4 U. mL-1.
O processo de imobilização foi concluído com 90 minutos de reação, sendo que o derivado de pó de sabugo de milho oxidado diretamente (2) foi capaz de reter maior atividade enzimática. Estes resultados mostram grande potencial para produção de açúcar invertido com o uso do suporte de pó de sabugo-oxi-glutaraldeído-invertase, uma vez que a extração da enzima é simples e o derivado obtido no método proposto apresentou bons resultados de eficiência e rendimento de imobilização, podendo ser uma alternativa verde para o processo de imobilização e geração de um produto mais limpo.
Resumo (inglês)
The objective of this work was to identify the best physical method for invertase extraction from Saccharomyces cerevisiae and to analyze an alternative protocol for activating corncob powder for immobilization of the enzyme. The yeast was subjected to six physical disruption treatments: (1) freezing, (2) freezing with water, (3) ultrasound, (4) agitation in the presence of abrasives, (5) maceration without organic solvents, and (6) maceration with ether. The extract from the best method was partially purified. Corn cob powder was activated (1) with the formation of subsequent glyoxyl, amino, and glutaraldehyde groups, a method described by Guisán (2016), and (2) with direct oxidation, formation of amino and glutaraldehyde groups, also subsequent, being this is the proposed method for activation. Support-enzyme derivatives were analyzed for their enzymatic activity, recovered activity, and recovery efficiency. Of the six invertase extraction treatments studied, the method chosen as the best was pure freezing, which after partial purification resulted in an extract with 2.98 ± 0.7 U. mL-1. After final purification, the free enzyme showed 3.54 ± 0.4 U. mL-1.
The immobilization process was concluded with 90 minutes of reaction, and the directly oxidized corn cob powder derivative (2) was able to retain greater enzymatic activity. These results show great potential for the production of invert sugar with the use of cob-oxyglutaraldehyde-invertase powder support, since the enzyme extraction is simple and the derivative obtained in the proposed method showed good results in terms of efficiency and yield immobilization, being able to be a green alternative for the immobilization process and generation of a cleaner product.
Descrição
Palavras-chave
Invertase, Extração, Saccharomyces cerevisiae, Pó de sabugo de milho, Imobilização, Sacarose
Idioma
Português
