Publicação: Impacto da estimulação sequencial durante a maturação in vitro de oócitos bovinos
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Data
Autores
Orientador
Buratini Júnior, José 
Dellaqua, Thaisy Tino
Coorientador
Pós-graduação
Curso de graduação
Ciências Biomédicas - IBB
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
A maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos apresenta descompasso entre os processos
fisiológicos e há grande interesse no desenvolvimento de abordagens para melhorar sua
eficiência. Diante disso, o objetivo deste projeto foi de avaliar o impacto da estimulação
sequencial da cascata ovulatória durante a MIV de oócitos bovinos e avaliar o efeito deste
sistema sequencial associado a suplementação com NRG1 na etapa final do
procedimento, a fim de aproximar o sistema de cultivo ao ambiente in vivo durante o
cultivo. Assim, a MIV foi realizada com os seguintes tratamentos: FSH, SF (Sistema
Folicular) e SF-s/A (Sistema Folicular sem adição de ampirregulina) durante 6 horas de
cultivo e, em seguida, FSH, SF, S (MIV sequencial) e S+NRG1 (MIV sequencial +
NGR1) durante 12 e 22 horas de cultivo. Ao final de cada tempo de MIV, os oócitos
foram desnudos e corados com Hoechst para análise da progressão meiótica. Os dados
foram transformados em arco-seno, testados por ANOVA e as diferenças foram
consideradas significativas quando p ≤ 0,05. Em 6 horas de MIV, não houve diferenças
entre os grupos SF-s/A e FSH, ambos apresentaram oócitos no estágio de vesícula
germinativa, entretanto, o uso de AREG no SF promoveu um adiantamento da meiose,
uma vez que houve aumento da quebra da vesícula germinativa. Motivo este que nos
motivou a realizar um tratamento sequencial no meio SF durante a MIV. Assim, os grupos
SF e S apresentaram maior número de oócitos em metáfase I às 12h, diferindo de FSH,
enquanto S+NRG1 não apresentou diferenças dos demais grupos. Além disso, os oócitos
atingiram a metáfase II às 22 horas e não houve diferença entre os tratamentos. Concluise que o presente estudo fornece evidências que a MIV de oócitos bovinos pode ser
realizada de maneira sequencial, com o intuito de sincronizar a maturação nuclear com a
citoplasmática para melhorar a eficiência dos protocolos de MIV
Resumo (inglês)
In vitro maturation (MIV) of bovine oocytes shows a mismatch in physiological processes
and there is a big interest in the developing approaches to improve its efficiency.
Therefore, this project’s objective was to evaluate the impact of ovulatory cascade
sequential stimulation during MIV of bovine oocytes and to evaluate this sequential
system effects associated to NRG1 supplementation in the procedure final step, in order
to promote culture conditions more similar to the in vivo environment during the cell
culture. This way, the MIV was performed with the following treatments: FSH, SF
(follicular system) and SF- s/A (follicular system without addition of amphiregulin)
during 6 hours of culture and, following, FSH, SF, S (sequential MIV) and S+NRG1
(sequential MIV + NRG1) for 12 and 22 hours of cell culture. At the end of each MIV
time, the oocytes were denuded and stained with Hoechst to analyze the meiotic
progression. The data were transformed into arcsine, tested by ANOVA and the
differences were considered significant when P ≤ 0,05. At 6 hours of MIV, there were no
differences between the groups SF-s and FSH, both showing oocytes in stage of germinal
vesicle, however, when adding AREG in SF na advance in meiosis occurred, once there
was na increasement in germinal vesicle breakdown. This reason motivated us to perform
a sequential treatment in SF medium during the MIV. Thus, SF and S groups showed an
increased number in oocytes in metaphase I at 12 hours, differing from FSH, while
S+NRG1 did not showed differences to the other groups. Furthermore, oocytes reached
metaphase II at 22 hours and did not showed differences between treatments. It is
concluded that the present study provides evidence that bovine oocytes MIV can be
performed in sequential manner, with the aim of synchronizing nuclear maturation with
cytoplasmatic to improve the efficiency of MIV protocols.
Descrição
Palavras-chave
Maturação oocitária, Progressão meiótica, AREG, NRG1, Oocyte maturation, Meiotic progression
Idioma
Português
