Publication: Efeitos do 17β-estradiol na abundância de transcritos para enzimas envolvidas na síntese de PGF2α endometrial em fêmeas bovinas no final do diestro
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Date
Authors
Advisor
Membrive, Claudia Maria Bertan 
Pugliesi, Guilherme
Coadvisor
Graduate program
Farmacologia e Biotecnologia - IBB
Undergraduate course
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Type
Master's thesis
Access right
Acesso aberto
Abstract
Abstract (portuguese)
Em bovinos, o 17β-estradiol (17β-E2) estimula a expressão de receptores de estradiol (ER) e ocitocina (OXTR) no endométrio. A ativação de OXTR induz a ativação de uma complexa cascata que resulta na síntese de PGF2α. A hipótese é que o tratamento com 17β-E2, 15 dias após o estro (D15), modula a expressão gênica das proteínas quinase (PKC) e fosfolipase A2 (PLA2), ambas envolvidas na síntese de PGF2α e dependentes de cálcio. Objetivou-se neste estudo determinar os efeitos do 17β-E2 na abundância de trancritos (PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 e PTGS2) diretamente envolvidos na síntese de PGF2α. Novilhas (N=50), não prenhes, cíclicas, foram sincronizadas pela inserção de um dispositivo de liberação intravaginal contendo 0,558g de progesterona (P4), pela administração de 1 mg de benzoato de estradiol e 0,075 mg de D-Cloprostenol, ambos intramuscular (IM). Após 6 dias, foi injetado 0,075 mg de D-Cloprostenol, IM. Após 48 horas, o dispositivo contendo P4 foi removido e 0,150 mg de D-Cloprostenol foi administrado IM. Nesta ocasião, um adesivo foi inserido na base da cauda para a identificação dos estros (Boviflag Red Estrus Detector - ABS Pecplan) e observações de estro foram realizadas nos próximos 4 dias. Participaram do experimento somente novilhas identificadas em estro (D0 = dia do estro) e que ovularam (N=46). Entre D14 e D23, a área do corpo lúteo (CL; cm2), fluxo sanguíneo (%) e as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram avaliadas diariamente. No D15, as novilhas foram randomicamente divididas em dois grupos: Grupo Controle (C; 2mL de óleo de girassol puro, IM; N=22) ou Estradiol (E; 1mg 17β-E2 diluído em 2ml de óleo de girassol puro, IM, N=24). O momento da administração dos tratamentos foi considerado o tempo 0. Amostras de sangue foram obtidas de 0h a 7h, a cada hora, para a mensuração das concentrações de PGFM no D15. Depois da administração dos tratamentos, biópsias uterinas foram coletadas nos tempos 1,5h (C1,5h, N=8 e E1,5h; N =10) ou 3h (C3h, N =8 e E3h, N=11). A abundância de transcritos para os genes PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 e PTGS2 foi determinada por qPCR. No período entre o D18 e D20, houve menor área do CL no Grupo E (P = 0,023). O Grupo E apresentou maior concentração de PGFM (P = 0,0002) às 6h (225,45 ± 16,96 pg/mL) e 7h (285,58 ± 33,09 pg/mL) após a aplicação de 17β-E2. No D16 e D17, o Grupo E apresentou menor concentração de P4 (P = 0,019) no D16 (4,14 ± 0,97 ng/mL) e D17 (2,84 ± 0,79 ng/mL). A luteólise funcional do Grupo E foi antecipada em 1,14 dias (17,07 ± 0,43; P= 0,006). Da mesma forma, o Grupo E também apresentou antecipação da luteólise estrutural em 1,26 dias (18,42 ± 0,33; P= 0,026). Entre os grupos de tratamento, a abundância não diferiu para os genes PKCα (P = 0,79), PRKCβ (P = 0,17), AKR1B1 (P = 0,34) e PTGS2 (P = 0,22). Houve efeito de tratamento apenas para os transcritos PLA2G4 (P = 0,03) e AKR1C4 (P = 0,05), entretanto, a abundância de ambos diminuiu no Grupo Estradiol à 1,5 e 3,0 h após a administração do 17β-E2. Conclui-se que a aplicação de 17β-E2 no 15o dia do ciclo estral promoveu aumento das concentrações de PGFM e a antecipação da luteólise funcional e estrutural nas novilhas Nelore, contudo, este aumento não foi associado ao aumento da transcrição gênica das proteínas estudadas.
Abstract (english)
In cattle, 17β-estradiol (17β-E2) stimulates expression of estradiol (ER) and oxytocin receptor (OXTR) in the endometrium. The activation of OXTR leads to the induction of a complex cascade of molecular activation resulting in PGF2α synthesis. The hypothesis was that 17β-E2 treatment on day 15 (D15) after estrus modulates the gene expression of protein kinase (PKC) and phospholipase A2 (PLA2), both directly involved in the synthesis of PGF2α and calcium dependent. The aim of this study was to determine the effects of 17β-E2 on the abundance of key transcripts (PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 and PTGS2) involved in PGF2α signaling and synthesis. Nelore heifers (N=50), don't pregnant, cyclic were synchronized by insertion an intravaginal release device containing 0.558g of progesterone (P4), and by the administration of 1 mg of estradiol benzoate and 0.075 mg de D-Cloprostenol, both intramuscularly (IM). After 6 days, 0.075 mg D-Cloprostenol was injected, IM. After 48 hours the P4 device was removed and 0.150 mg D-Cloprostenol was administered IM. On this occasion, an adhesive was inserted at the base of the tail for the identification of estrus (Boviflag Red Estrus Detector - ABS Pecplan) and estrous observation were made in the next 4 days. Participated in the experiment only the heifers identified in estrus (D0 = day of estrus) that ovulated (N=46). Between D14 and D23, corpus luteum (CL) area (cm2), blood flow (%), and progesterone (P4) plasmatic concentrations were evaluated daily. On D15 heifers were assigned randomly to one of two groups: Control Group (C; 2mL of pure sesame oil, IM; N=22) or Estradiol (E; 1mg 17β-E2 diluted in 2mL of pure ses-ame oil, IM, N=24). Administration of treatment was considered time 0h. Blood sam-ples were obtained from 0h to 7h, every hour, for the measurement of the PGFM con-centrations on D15. After the treatments, uterine biopsies were collected at times 1,5h (C1,5h, N=8 and E1,5h; N=10) or 3h (C3h, N=8 and E3h, N=11). Transcript abun-dance PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 and PTGS2 genes were deter-mined by qPCR. In the period between D18 and D20, there was a smaller area of CL in Group E (P = 0.023). Group E showed higher concentration of PGFM (P = 0.0002) at 6 hour (225.45 ± 16.96 pg / mL) and 7 hour (285.58 ± 33 , 09 pg / mL) after the application of 17β-E2. At D16 and D17, Group E showed lower concentration of P4 (P = 0.019) at D16 (4.14 ± 0.97 ng / mL) and D17 (2, 84 ± 0.79 ng / mL). Functional luteolysis in Group E was antecipated 1.14 days (17.07 ± 0.43 days; P = 0.006). Similarly, Group E also showed an anticipation of structural luteolysis in 1.26 days (18.42 ± 0.33 vs. 19.68 ± 0.42 days; P = 0.026). Among the treatment groups, abundance did not differ for the PKCα (P = 0.79), PRKCβ (P = 0.17), AKR1B1 (P = 0.34) and PTGS2 (P = 0.22) genes. There was a treatment effect only for the PLA2G4 (P = 0.03) and AKR1C4 (P = 0.05) transcripts, however, the abundance of both decreased in the Group E at 1.5 and 3.0 h after administration of 17β-E2. It was concluded that the application of 17β-E2 on the 15th day of the estrous cycle promotes increased concentrations of PGFM and anticipation of functional and structural luteolysis in Nellore heifers, however, this increase was not associated with increased gene transcription of the studied proteins.
Description
Keywords
Luteólise, Prostaglandina, Endométrio, Bovinos, Luteolysis, Prostaglandin, Endometrium, Cattle
Language
Portuguese
