Caracterização da diversidade genética de Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville por marcador molecular AFLP e transferência de microssatélites

Abstract

A espécie Stryphnodendron adstringens (Leguminosae) é conhecida popularmente como barbatimão e o extrato das cascas é utilizado como cicatrizante. O objetivo deste trabalho foi estudar a variabilidade genética da espécie utilizando o marcador molecular de polimorfismo de comprimento amplificado (AFLP) e testar a transferência de microssatélites de Anadenanthera colubrina, Hymenaea courbaril e Copaifera langsdorffii. Foram coletados acessos localizados nos municípios de Cristalina, São João D’Aliança, Campo Alegre e Caldas Novas (GO); Delfinópolis, Luislândia, Lagoa Formosa, Sacramento e Araxá (MG) e Paranapanema, Cristais Paulista e Botucatu (SP). O DNA genômico foi extraído de folhas e as análises de polimorfismo seguiram as etapas de digestão, ligação, pré-amplificação e amplificação. Os produtos AFLP foram separados em gel desnaturante de poliacrilamida 6% com tampão TBE 1X. A eletroforese foi realizada em voltagem constante de 80W em temperatura máxima de 50ºC por 4 horas. O gel foi corado com solução de nitrato de prata e revelado em carbonato de sódio. Na análise por marcador AFLP foram produzidas 237 bandas polimórficas. A variabilidade dentro das populações foi maior (70,93%) que entre as populações (29,06%) com um valor de Fst 0.2906 indicando alta estruturação populacional. A população de Luislândia apresentou maior porcentagem de loci polimórficos (87,35), seguida da população de Cristalina (45,85). A menor variabilidade foi encontrada em Caldas Novas (22,92) e as demais ficaram na média (34,3). O Método da Média Aritmética não Ponderada (UPGMA) reuniu as populações em três grupos. Quanto aos testes de transferência de microssatélites, dos 20 iniciadores de A. colubrina testados, dez apresentaram resultados de transferência, porém somente um...

Stryphnodendron adstringens a Leguminosae species is popularly known as barbatimão and the extract of its barks is widely used as healing agent. The genetic variation of 12 populations of S. adstringens was determined in this study by using Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) molecular markers transference of microsatellites of Anadenanthera colubrina, Hymenaea courbaril and Copaifera langsdorffii. Accessions were collected in the cities of Cristalina, São João D’Aliança, Campo Alegre and Caldas Novas (GO), Delfinópolis, Luislandia, Lagoa Formosa, Sacramento and Araxá (MG) and in Paranapanema, Cristais Paulista and Botucatu (SP). The genomic DNA was extracted from the leaves and the polymorphism analysis followed multiple steps including DNA digestion, ligation, pre-amplification and amplification. Amplification products were analyzed on denaturing polyacrylamide sequencing gel and running electrophoretic steps at 80 W with maximum temperature at 50ºC for 4 h. The gel was stained with silver nitrate solution and developed in sodium carbonate. The AFLP analysis conducted with three primer combinations using the EcoRI and MseI restriction enzymes generated 237 polymorphic bands. The AFLP binary data were used to determine allele frequencies. Population structure was evaluated performing analysis of molecular variance (AMOVA) which allowed the estimation of the total genetic variance among and inside populations. A descriptive analysis of the total variability was obtained by calculating the percentage of polymorphic loci. Genetic variance 4 within populations was higher (70,93%) compared to the differentiation estimated among populations (29,06%). The fixation index (Fst) was 0.2906 indicating highly significant population structuring. The population from Cristalina... (Complete abstract click electronic access below)