Análise de microRNAs exossomais em lavado uterino de gestações produzidas por inseminação artificial e fertilização in vitro

Abstract

O objetivo do presente trabalho foi investigar a modulação dos miRNAs exossomais em lavado uterino de vacas não-lactantes por meio de gestações produzidas por inseminação artificial (IA) e fertilização in vitro (FIV) aos 18 e 32 dias de prenhez, com a finalidade de compreender o papel dos miRNAs na comunicação materno-fetal, bem como identificar os possíveis fatores envolvidos na perda da gestação após a fertilização in vitro. Coletamos o fluido uterino de vacas aos 18 e 32 dias de gestação, produzidos por ambos os métodos de reprodução assistida. O RNA total foi extraído para a análise de microtranscriptoma pelo método de microarranjo. Os genes-alvo foram identificados para todos os miRNAs diferencialmente expressos, e o enriquecimento de vias foi realizado. Aos 18 dias, 12 miRNAs tinham aumento de expressão para o grupo FIV e 8 para o grupo IA. Aos 32 dias, 5 miRNAs, estavam com a expressão aumentada no grupo FIV e 8 no grupo IA. Com a análise de enriquecimento, 61 vias foram obtidas, incluindo algumas relacionadas com a implantação prejudicada, reabsorção fetal e restrição de crescimento intrauterino aos 18 e 32 dias em FIV. Nossos dados focaram no período de pré-implantação (18 dias) e pós-implantação (32 dias), sugerindo que as alterações na expressão dos miRNAs exossomais pós-FIV podem ocasionar falhas na comunicação materno-fetal aos 18 dias e com adesão e crescimento aos 32 dias, contribuindo para alguns dos problemas frequentemente encontrados em gestações de fertilização in vitro.

The aim of the present study was to investigate the modulation of exosomal miRNAs in uterine flushes of cows non-lactating through pregnancies produced by artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF) at 18 and 32 days pregnancy, for the purpose of understanding the role of miRNAs in maternal-fetal communication, as well as identifying possible factors involved in pregnancy failure following IVF. We collected uterine fluid from indicine cows at 18 and 32 days of pregnancy, produced by both assisted reproductive methods. Total RNA was extracted for microtranscriptome analysis by microarray. Target genes were identified for all differentiatly expressed miRNAs, and pathway enrichment analysis was performed. At 18 days, 12 microRNAs had increased expression in the IVF group and 8 in the AI group. At 32 days, 5 microRNAs were up-regulated in the IVF group and 8 in the AI group. Following enrichment analysis, 61 pathways were obtained, including pathways related to impaired implantation, fetal resorption and intrauterine growth restriction at 18 and 32 days in IVF. Our data, focused on the pre-implantation (18 days) and post-implantation (32 days) stages, suggests that altered exosomal miRNA expression post-IVF may lead to failures in fetal-maternal communication at 18 days and adhesion, growth at 32 days, thus contributing to some of the problems commonly seen in IVF pregnancies.