Identificação criminal de espécies da fauna silvestre por DNA mitocondrial

Abstract

O tráfico, contrabando e comércio ilegal de animais é a quarta atividade ilícita mais comum no mundo, colocando em risco a extinção de diversas espécies. Além disso, o comércio ilegal de animais silvestres pode ser meio de veiculação de enfermidades, principalmente de caráter zoonótico, ao serem transportadas por animais. O trabalho tem por objetivo identificar espécies de animais da fauna silvestre através do DNA mitocondrial (mtDNA), tricologia e determinar a prevalência de Trypanosoma cruzi agente etiológico da enfermidade de Chagas, uma Enfermidade Tropical Negligenciada (NTD), segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS). Foram coletadas amostras de tecido muscular, pele, sangue e pelos em animais oriundos de apreensões no território brasileiro. Para a identificação genética, foi sequenciada uma região conservada do mtDNA de aproximadamente 600 pares de bases e comparados com o banco de dados genético Barcode of Life Database (BOLD). A identificação por pelos foi realizada através de análise comparada e o diagnóstico T. cruzi através da técnica Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP), uma técnica rápida, barata e sensível. Foram identificados animais das espécies Dasypus sp., Mazama gouazoubira, Pantera onca, Cerdocyon thous, Tamandua tetradactyla, Didelphis aurita, Puma concolor, Myoprocta sp., Cavia sp., Galictis cuja; através do sequenciamento genético do mtDNA e as espécies Alouatta sp., Ozotoceros bezoarticus, Sylvilagus brasiliensis, Didelphis albiventris, Panthera onca, Puma concolor, Myrmecophaga tridactyla, Leopardus tigrinus, Dasyprocta sp.; por meio da morfologia dos pelos, verificou-se que a associação das técnicas é uma potencial ferramenta para a identificação de espécies. Com relação ao diagnóstico por meio de LAMP,verificou-se positividade de 50% (25/50) das amostras, sendo potenciais reservatórios do parasita T. cruzi.

Animal trafficking, smuggling and illegal trade is the fourth most common illegal activity in the world, increases the risk of extinction of several endangered species. An important point concerning illegal animal trade and the increasing globalization is that represents a possible vehicle for illness spreading, including zoonosis, creating a health public issue. The aim of this research is to identify species from the wildlife by mitochondrial DNA (mtDNA), hair and determines the prevalence of the zoonotic agent Trypanosoma cruzi, etiological agent of Chagas’ disease, a Neglected Tropical Disease (NTD) according to World Health Organization (WHO). Samples were collected from blood, muscle and skin from trafficking animals in Brazilian territory. A preserved region from mtDNA (600 base pair) was sequenced and compared to the Barcode of Life Database (BOLD) in order to do the genetic identification. Hair identification was complete by compared analysis. The diagnosis of T. cruzi ware made using the Loop-mediated Isotehrmal Amplification (LAMP) assay, a rapid, cheap and sensible technique. Have been identified the following species: Dasypus sp., Mazama gouazoubira, Pantera onca, Cerdocyon thous, Tamandua tetradactyla, Didelphis aurita, Puma concolor, Myoprocta sp., Cavia sp., Galictis cuja; using mtDNA sequencing and these species: Alouatta sp., Ozotoceros bezoarticus, Sylvilagus brasiliensis, Didelphis albiventris, Panthera onca, Puma concolor, Myrmecophaga tridactyla, Leopardus tigrinus, Dasyprocta sp.; by hair morphology analysis. The identification could be effective because of its association between forensic genetic and trichology techniques. In our research 50% (25/50) of animals were positive in LAMP assay to T. cruzi. This analysis could be important to identify reservoirs and the risk of animal trafficking to human health.

El tráfico, contrabando y comercialización ilegal de animales es la tercera actividad ilícita que más ocurre en el mundo, poniendo en riesgo la extinción de muchas especies. Además el comercio ilegal puede ser un vehículo de transmisión de enfermedades, principalmente las zoonosis, que pueden ser llevadas por los animales. La investigación tiene por objetivo identificar especies de animales de la fauna silvestre a través de ADN mitocondrial (mtDNA), tricología y la determinación de prevalencia del parásito Trypanosoma cruzi, causante de la enfermedad de Chagas, una Enfermedad Tropical Desatendidas (NTD) de acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS). Se recogieron muestras de tejido muscular, piel, sangre y pelos de animales procedentes de aprensión en el territorio nacional de Brasil. Para la identificación genética, fue realizado secuenciación de una región conservada del mtDNA con aproxidamente 600 pares de bases y luego fueron comparados con el banco de datos genético Barcode of Life Database (BOLD). La identificación por pelos ha sido llevada a cabo por análisis comparado y el diagnostico de los agentes infecciosos con carácter zoonosis fue determinado con la técnica Loop-mediated Isotehrmal Amplification (LAMP), que es sensible, barata y rápida. Los animales identificados fueron Dasypus sp., Mazama gouazoubira, Pantera onca, Cerdocyon thous, Tamandua tetradactyla, Didelphis aurita, Puma concolor, Myoprocta sp., Cavia sp., Galictis cuja; por medio de secuenciación del mtDNA y los especies: Alouatta sp., Ozotoceros bezoarticus, Sylvilagus brasiliensis, Didelphis albiventris, Panthera onca, Puma concolor, Myrmecophaga tridactyla, Leopardus tigrinus, Dasyprocta sp.; por medio de la morfología de pelos. La asociación de la genética forense y morfología de pelos es una buena herramienta para obtener la identificación. En el LAMP, hubo una positividad de un 50% (25/50) de las muestras, sin embargo, pueden ser potenciales reservorios para el parásito T. cruzi.