Sensibilidade e monitoramento genético de populações de Phyllosticta citricarpa a fungicidas inibidores da quinona externa (QoI)

Abstract

A mancha preta dos citros (MPC), causada por Phyllosticta citricarpa, é uma doença quarentenária, e está presente em diversos países do mundo. Os frutos sintomáticos têm seu valor depreciado para o mercado de frutas frescas, e em pomares com elevada severidade mais de 85% dos frutos podem cair prematuramente. Não há variedades de laranjeiras doces resistentes, sendo o controle feito por meio de medidas culturais e por meio de fungicidas do grupo das estrobilurinas, constituindo-se da melhor alternativa, além de praticamente ser única. Nas diversas regiões produtoras do mundo, incluindo o Brasil, são realizadas diversas aplicações destes fungicidas há quase duas décadas. Neste estudo, foi caracterizada a sensibilidade de 50 isolados de P. citricarpa oriundos das mais importantes regiões citrícolas do Brasil, aos fungicidas trifloxistrobina e piraclostrobina, os mais utilizados para o controle da MPC. Os isolados foram avaliados a 0,0003; 0,003; 0,03; 0,3; 3,0; 30,0 e 300,0 µg mL-1, sendo empregado o método da microtitulação. Isolados com valores de EC50 considerados resistentes a uma ou mais estrobilurinas avaliadas foram submetidos à busca de mutações no gene cyt b. A pesquisa concentrou-se na investigação da mutação na região F129L, a qual é de ocorrência generalizada e confere resistência do fungo aos fungicidas do grupo das estrobilurinas, utilizando para isso sequenciamento de parte do gene cyt. Fenótipos extremos de sensibilidade e resistência a ambos fungicidas estrobilurinas foram detectados nas diferentes populações do patógeno analisadas pela microtitulação. Na busca de mutações no gene cyt b, a mutação F129L não foi encontrada por pirosequenciamento. A ausência dessa mutação no gene da cyt b dos isolados considerados resistentes sugere que outros mecanismos de resistência podem estar envolvidos. Os resultados obtidos com esse estudo podem servir de suporte para a tomada de decisões de manejo adequado para a citricultura brasileira; além disso, são importantes para futuros estudos sobre a evolução do patógeno com a pressão de seleção exercida pelos fungicidas.

The black spot of citrus (MPC), caused by Phyllosticta citricarpa, is a quarantine disease, and is present in several countries of the world. Symptomatic fruits have their value depreciated for the fresh fruit market, and in orchards with high severity more than 85% of the fruits may fall prematurely. There are no resistant sweet orange varieties, and the control is done by means of cultural measures and by means of strobilurin fungicides, constituting the best alternative, besides being practically unique. In the various producing regions of the world, including Brazil, several applications of these fungicides have been carried out for almost two decades. In this study, the sensitivity of 50 isolates of P. citricarpa from the most important citrus regions in Brazil to the fungicides trifloxystrobin and pyraclostrobin, the most used for the control of MPC, was characterized. The isolates were evaluated at 0.0003; 0.003; 0.03; 0.3; 3.0; 30.0 and 300.0 µg mL-1 , using the microtiter method. Isolates with EC50 values considered resistant to one or more strobilurins evaluated were subjected to the search for mutations in the cyt b gene. Extreme phenotypes of sensitivity and resistance to both strobilurin fungicides were detected in the different populations of the pathogen analyzed by microtiter. In the search for mutations in the cyt b gene, the F129L mutation was not found by pyrosequencing. The absence of this mutation in the cyt b gene of isolates considered resistant suggests that other mechanisms of resistance may be involved. The results obtained with this study can serve as a support for making appropriate management decisions for Brazilian citrus; in addition, they are important for future studies on the evolution of the pathogen with the selection pressure exerted by fungicides.