Estudo do potencial citotóxico e mutagênico da substância  sintética7-hidroxi-3-(3’-hidroxifenil) cumarina em células humanas  em cultura

As cumarinas são metabólitos secundários produzidos por diversas plantas e muitas delas apresentam um vasto espectro de atividades biológicas e farmacológicas. Frente a essa potencialidade, cumarinas sintéticas vêm sendo obtidas com o intuito de potencializar suas atividades. Esse é o caso da 7-hidroxi-3-(3’- hidroxifenil)cumarina, que após ser sintetizada revelou uma potente atividade antioxidante, constituindo uma molécula muito promissora para o tratamento de doenças neurodegenerativas. O presente trabalho foi elaborado visando avaliar o potencial citotóxico e genotóxico da cumarina sintética 7-hidroxi-3-(3’- hidroxifenil)cumarina em células de hepatoma humano HepG2/C3A. A citotoxicidade foi analisada pelos ensaios do MTT e coloração com o corante azul de tripan. As células HepG2/C3A foram cultivadas em meio DMEM/HIGH glucose, suplementado com 10% de soro fetal bovino e antibiótico/antimicótico. A análise do potencial genotóxico da cumarina foi realizada através do ensaio do cometa, e o potencial clastogênico/aneugênico através do teste do micronúcleo com bloqueio de citocinese. Os resultados com ambos os ensaios de citotoxicidade mostraram que a cumarina teste não acarretou diminuição na viabilidade celular nas concentrações entre 0,01 e 10 µg/ml, em exposições de 24, 48 e 72 h. O ensaio cometa evidenciou que não houve aumento de danos no DNA das células expostas à substância teste em relação ao grupo controle. Da mesma forma, não foi observado aumento de células binucleadas com micronúcleo e/ou outras alterações nucleares pelo teste do micronúcleo. Considerando-se as condições experimentais do presente estudo, pode-se concluir que a 7-hidroxi-3- (3’-hidroxifenil) cumarina não apresentou efeitos citotóxicos, nem efeitos genotóxicos em células de hepatoma humano HepG2/C3A, até a concentração máxima testada de 10 µg/ml.

Abstract (english)

Coumarins are secondary metabolites produced by several plants and many of them have a wide spectrum of biological and pharmacological activities. Faced with this potential, synthetic coumarins have been obtained in order to enhance their activities. This is the case of 7-hydroxy-3-(3'-hydroxyphenyl) coumarin, which after being synthesized revealed a potent antioxidant activity, constituting a very promising molecule for the treatment of neurodegenerative diseases. The present work was designed to evaluate the cytotoxic and genotoxic potential of the synthetic coumarin 7- hydroxy-3-(3'-hydroxyphenyl)coumarin in HepG2/C3A human hepatoma cells. The cytotoxicity was analyzed by MTT and trypan blue staining assays. HepG2/C3A cells were cultured in DMEM/HIGH glucose medium, supplemented with 10% fetal bovine serum and antibiotic/antimycotic. The analysis of the genotoxic potential of coumarin was performed using the comet assay, and the clastogenic/aneugenic potential using the micronucleus test with cytokinesis blockade. The results with both cytotoxicity assays showed that the test coumarin did not cause a decrease in cell viability at concentrations between 0.01 and 10 µg/ml, in exposures of 24, 48 and 72 h. The comet assay showed that there was no increase in DNA damage in cells exposed to the test substance compared to the control group. Likewise, no increase in binucleated cells with micronucleus and/or other nuclear alterations was observed by the micronucleus test. Considering the experimental conditions of the present study, it can be concluded that 7-hydroxy-3-(3'-hydroxyphenyl) coumarin did not show cytotoxic or genotoxic effects in HepG2/C3A human hepatoma cells, up to the maximum concentration 10 µg/ml tested.