Publication: Terapia fotodinâmica antimicrobiana com utilização da Clorina-e6 em diferentes concentrações e comprimentos de onda em biofilme simples de bactéria Periodontopatogênica
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Date
Authors
Advisor
Zandim-Barcelos, Daniela Leal 
Coadvisor
Graduate program
Undergraduate course
Odontologia - FOAR
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Type
Undergraduate thesis
Access right
Acesso aberto
Abstract
Abstract (portuguese)
A Raspagem e Alisamento Radicular (RAR) é considerada a terapia não-cirúrgica de
escolha para tratamento da doença periodontal (DP). No entanto, esta terapia pode
apresentar limitações e insucessos quando utilizada isoladamente em determinados
casos clínicos. Assim, terapias alternativas têm sido investigadas para suprir
deficiências da RAR que podem estar relacionadas ao limitado acesso à superfície
radicular, a presença persistente de periodontopatógenos nas bolsas mais profundas
e a habilidade de algumas bactérias em invadir tecidos adjacentes. Dentre estas
terapias, destaca-se a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). Tendo em vista os
resultados favoráveis obtidos com uso da Ce6 na terapia fotodinâmica em biofilme
monoespécie de A. actinomycetemcomitans em nosso projeto anterior, novos
experimentos foram propostos. O objetivo foi avaliar o efeito da aPDT com utilização
da clorina-e6 em diferentes concentrações e comprimentos de onda (ativação por luz
azul e luz vermelha) em biofilme monoespécie de Porphyromonas gingivalis e em
biofilme multiespécie de A. actinomycetemcomitans, S. oralis, F. nucleatum, P.
gingivalis. Foi realizada a padronização da formação dos biofilmes seguindo
parâmetros de densidade óptica e contagem de colônias conforme curva de
crescimento dos microrganismos previamente estabelecida. O biofilme simples de P.
gingivalis e o biofilme multiespécie foram formados em condições de atmosfera e meio
de crescimento adequados por 5 dias. Posteriormente, estes biofilmes foram tratados
com diferentes protocolos, incluindo controle positivo (clorexidina – CHX 0,2%) e
negativo (água destilada + DMSO 1%), grupos tratados apenas com
fotossensibilizador (FS), grupos tratados apenas com luz e grupos tratados com aPDT
(FS + luz). Foram testadas diferentes concentrações da clorina-e6, dois comprimentos
de onda (emitidos em azul e vermelho) e uma intensidade de luz (30 J/cm2
). A análise
quantitativa foi realizada por contagem de colônias e transformadas em UFC/mL para
o biofilme monoespécie de P. gingivalis e por meio de RT-qPCR para biofilme
multiespécie. A distribuição dos dados foi avaliada por meio do teste D'Agostino &
Pearson, e testes estatísticos adequados foram utilizados para análise dos dados. O
uso da aPDT mediado por clorina-e6 em ambos os comprimentos de onda (azul e
vermelho) promoveu eliminação bacteriana total no biofilme simples de P. gingivalis e
resultou na redução da contagem bacteriana de todas as espécies do biofilme
multiespécie, sendo este efeito mais evidente para S. oralis e P. gingivalis. Não foram
observadas diferenças estatisticamente significantes entre as duas concentrações de
Ce6 testadas em ambos os biofilmes. Baseado nos resultados obtidos, a aPDT com
utilização da clorina-e6 pode ser uma terapia adjuvante promissora no tratamento nãocirúrgico da doença periodontal.
Abstract (english)
Scaling and Root Planing (RAR) is considered the non-surgical therapy of choice for
periodontal disease treatment (PD). However, this therapy may present restrictions
and failures in certain clinical cases. Thus, alternative therapies have been
investigated to overcome RAR deficiencies that may be related to limited access to the
root surface, the persistent presence of periodontopathogens in deep periodontal
pockets and the ability of some bacteria to invade adjacent tissues. Among these
therapies, antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) stands out. In view of the results
obtained with the use of Ce6 in photodynamic therapy in monospecies biofilm of A.
actinomycetemcomitans in our previous project, new experiments were proposed. The
objective was to evaluate the effect of aPDT with the use of chlorin-e6 at different
concentrations and wavelengths (activation by blue light and red light) on a single
species biofilm of Porphyromonas gingivalis and on a multispecies biofilm of A.
actinomycetemcomitans, S. oralis, F.nucleatum, P.gingivalis. The standardization of
biofilm formation was performed following parameters of optical density and colony
count according to the previously established growth curve of microorganisms. The
single biofilm of P. gingivalis and the multispecies biofilm were formed under conditions
of adequate atmosphere and growth medium for 5 days. Subsequently, these biofilms
were treated with different protocols, including positive control (chlorhexidine - CHX
0.2%) and negative control (distilled water + DMSO 1%), groups treated only with
photosensitizer (PS), groups treated only with light and groups treated with aPDT (FS
+ light). Different concentrations of chlorin-e6, two wavelengths (emitted in blue and
red) and a light intensity (30 J/cm2) were tested. Quantitative analysis was performed
by counting colonies and transforming them into CFU/mL for the monospecies biofilm
of P. gingivalis and by means of RT-qPCR for the multispecies biofilm. Data distribution
was evaluated using the D'Agostino & Pearson test, and appropriate statistical tests
were used for data analysis. The use of aPDT mediated by chlorin-e6 at both
wavelengths (blue and red) promoted total bacterial elimination of the P. gingivalis
single specie biofilm and resulted in a reduction of the bacterial count for all species of
the multispecies biofilm, this effect was more evident for S. oralis and P. gingivalis. No
statistically significant differences were observed between the two tested Ce6
concentrations for both biofilms. Based on the results obtained, aPDT with the use of
chlorin-e6 may be a promising adjuvant therapy in the non-surgical treatment of
periodontal disease.
Description
Keywords
Fotoquimioterapia, Doenças periodontais, Periodonto, Microbiologia, Photochemotherapy, Periodontal diseases, Periodontium, Microbiology
Language
Portuguese
