Publication: Identificação de Candida spp. em próteses totais por um método molecular
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Date
Authors
Advisor
Mima, Ewerton Garcia de Oliveira 
Coadvisor
Graduate program
Undergraduate course
Odontologia - FOAR
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Type
Undergraduate thesis
Access right
Acesso restrito
Abstract
Abstract (portuguese)
A estomatite protética (EP) é uma doença inflamatória crônica da mucosa palatina
associada a Candida spp. O diagnóstico da EP é feito clinicamente sem levar em
consideração a presença de Candida spp. Métodos de cultura e ensaios bioquímicos
são usados para detecção de Candida spp. em amostras clínicas, e algumas
investigações relatam o uso de métodos moleculares para detectar espécies fúngicas
recuperadas de infecções, como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
associada à curva de melting (CM). No entanto, até onde sabemos, nenhum outro
estudo relatou o uso desse método para identificação de Candida spp. em próteses
totais. Assim, neste estudo utilizamos PCR-CM para identificação de Candida spp. em
próteses totais e possível diagnóstico de EP. Amostras microbiológicas foram
coletadas de pacientes com e sem EP (n = 20 cada) e culturas em meios de cultura
específicos, isolamento de DNA e PCR-CM. Cepas de ATCC foram submetidas aos
mesmos procedimentos e utilizadas como referência para identificação, bactérias e
DNA de mamíferos foram utilizados como controles. Quando a identificação das
amostras clínicas por PCR-CM não foi possível, as colônias cultivadas das amostras
clínicas foram submetidas aos mesmos métodos moleculares. A concordância entre
a identificação presuntiva por CHROMAgar Candida e PCR-CM foi realizada pelo
índice kappa de Cohen (k) e os parâmetros de diagnóstico (sensibilidade,
especificidade, valores preditivos positivos e negativos) foram determinados. PCRCM identificou diretamente de amostras clínicas 11, 10 e 4 espécies de C. albicans
(Ca), C. glabrata (Cg) e C. tropicalis (Ct), com sensibilidade de 100% para Ca e Ct e
especificidade de 100% para Cg. O CHROMAgar Candida demonstrou que 35% das
colônias de cada grupo eram verdes, presumivelmente identificadas como Ca ou C.
dubliniensis (Cd), e a PCR-CM identificou 11 amostras clínicas (9 Ca e 2 Ct). No
entanto, não foi possível identificar diretamente 5 e 4 amostras clínicas identificadas
presuntivamente como Ca e Ct e amostras com espécies mistas. A identificação de
colônias dessas amostras clínicas submetidas à PCR-CM identificou 22 amostras
como Ca, Cg, Ct e Cd, mas 7 amostras (1 espécie única e 6 espécies mistas) ainda
não foram identificadas. A concordância foi substancial (k=0,826) entre os métodos,
sendo que o CHROMAgar Candida apresentou sensibilidade de 100% para Ca e
especificidade de 100% para Ct e 97% para Cg. Como conclusão, PCR-CM foi uma
ferramenta potencial para identificação de Ca e Ct de próteses sem cultivo prévio,
enquanto amostras com Cg, Cd e espécies mistas necessitaram de cultivo prévio ao
PCR-CM.
Abstract (english)
Denture stomatitis (DS) is a chronic, inflammatory disease of the palatal mucosa
associated to Candida spp. The diagnosis of DS is performed clinically without taking
into consideration the presence of Candida spp. Culture methods and biochemical
assays are used for detection of Candida spp. in clinical samples, and some
investigations report the use of molecular methods to detect fungal species recovered
from infections, such as the Polymerase Chain Reaction (PCR) associated with melting
curve (MC). However, to the best of our knowledge, no other study reported the use of
this method for Candida spp. identification in complete dentures. Thus, in this study
we used PCR-MC for identification of Candida spp. in complete dentures and possible
diagnosis of DS. Microbiological samples were collected from patients with and without
DS (n = 20 each) and cultures in specific culture media, DNA isolation, and PCR-MC.
ATCC strains were submitted to the same procedures and used as reference for
identification, and bacteria and mammalian DNA were used controls. When the
identification of clinical samples by PCR-MC was not possible, the colonies cultivated
from the clinical samples were submitted to the same molecular methods. The
concordance between the presumptive identification by CHROMAgar Candida and
PCR-MC was performed by Cohen’s kappa index (k) and the diagnosis parameters
(sensitivity, specificity, positive and negative predictive values) were determined. PCRMC identified directly from clinical samples 11, 10 and 4 species of C. albicans (Ca),
C. glabrata (Cg) and C. tropicalis (Ct), with sensitivity of 100% for Ca and Ct and 100%
specificity for Cg. The CHROMAgar Candida demonstrated that 35% of colonies from
each groups were green, presumptively identified as Ca or C. dubliniensis (Cd), and
PCR-MC identified 11 clinical samples (9 Ca and 2 Ct). However, it was not possible
to identify directly 5 and 4 clinical samples presumptively identified as Ca and Ct and
samples with mixed species. The identification of colonies from these clinical samples
submitted to PCR-MC identified 22 samples as Ca, Cg, Ct, and Cd, but 7 samples (1
single-species and 6 mixed-species) were not identified yet. The concordance was
substantial (k=0.826) between the methods, and CHROMAgar Candida showed
sensitivity of 100% for Ca and specificity of 100% for Ct and 97% for Cg. As conclusion,
PCR-MC was a potential tool for identification of Ca and Ct from dentures without
previous cultivation, while samples with Cg, Cd, and mixed-species required cultivation
previous to PCR-MC.
Description
Keywords
Candidíase, Reação em cadeia da polimerase, Estomatite sob prótese, Candidiasis, Polymerase chain reaction, Stomatitis, denture
Language
Portuguese
