Estudos citogenéticos em cultura de células da família Characidae

Abstract

A cultura de células é uma excelente técnica empregada para obter preparações cromossômicas de qualidade, principalmente em peixes de pequeno porte. Em vista disto, utilizamos esta ferramenta para obter preparações cromossômicas em peixes neotropicais, a qual possui uma rica e diversificada fauna de peixes representada, entre outras, pela família Characidae, com 1161 espécies. Estudos citogenéticos em Characidae revelam grande diversidade de cariótipos entre espécies e populações, com número diplóide modal igual a 2n = 50-52 e número fundamental variando de 56 a 132, o que mostra uma ampla variação da estrutura do cariótipo. Considerando que a grande biodiversidade de peixes encontrada na região Neotropical, a dificuldade em se obter preparações cromossômicas de boa qualidade e ausência de informações citogenéticas da grande maioria dos representantes da família Characidae, o presente estudo teve como objetivo desenvolver linhagens células de diferentes espécies da família Characidae e aplicar técnicas citogenéticas clássicas e moleculares, tais como a detecção de padrões de distribuição da heterocromatina constitutiva (bandamento C), as regiões organizadoras de nucléolo (Ag-RON) e sequências gênicas, a partir da hibridação fluorescente in situ (FISH). Dentro dessa família, encontramos as espécies: Hollandichthys multifasciatus, Hyphessobrycon boulengeri, Moenkhausia oligolepis, pertencentes à subfamília Stethaprioninae, Spintherobolus leptoura da subfamília Spintherobolinae, Roeboides descavaldensis representante do Clado B e Mimagoniates microlepis da subfamília Stervadiinae, que foram usadas como modelos nessa fase do estudo. Seis indivíduos de H. boulengeri, três indivíduos de H. multifasciatus, 18 de M. microlepis e 5 indivíduos de S. leptoura, coletados em um pequeno tributário do rio Ribeira do Iguape, Iguape/SP e um indivíduo de M. oligolepis coletado no Córrego Estiva, Diamantino/MT foram utilizados para obtenção das culturas de células e 7 indivíduos de R. descalvadensis foram submetidos à obtenção de cromossomos clássica. Posteriormente, essas preparações cromossômicas foram dispostas em lâminas para experimentos de hibridização in situ fluorescente (FISH), bandeamento C e regiões organizadoras de nucléolos (RONs). Fragmentos de tecido muscular e pele foram usados para isolar as células e então mantidas a 27,5oC e 5%CO2 em meio completo até alcançar 80% de confluência e, posteriormente, subcultivadas. As células subcultivadas foram tratadas com colchicina para obtenção dos cromossomos mitóticos e submetidos à coloração convencional. As culturas celulares de todas as espécies começaram a aderir ao substrato após 24 horas de cultivo e apresentaram morfologia fibroblastóide em 72 horas. Até o momento não foi possível continuar o cultivo de células de S. leptoura devido às contaminações bacteriológicas e a dificuldade no estabelecimento da cultura primária. Os estudos cariotípicos para as espécies H. multifasciatus, H. boulengeri e M. oligolepis mostraram que ambas as espécies apresentam número modal 2n=50 cromossomos, e para M. microlepis e R. descalvadensis, 2n=52. Todos resultados citogenéticos encontrados são concordantes aos já descritos na literatura. Assim, pretendemos agregar ainda mais informações para essa família e de alto valor científico sobre sua diversidade cromossômica. Além disso, o desenvolvimento dessas linhagens celulares irão acrescentar ainda mais informações ao nosso banco de células criopreservadas.