Produção e avaliação de anticorpos IgY para detecção de antígenos de Cryptosporidium parvum utilizando ELISA de captura em amostras fecais de bovinos

Abstract

Cryptosporidium spp. são protozoários coccídeos que infectam uma grande variedade de vertebrados. Sua transmissão ocorre de forma fecal-oral e frequentemente devido a ingestão de água e alimentos contaminados ou por contato indireto ou direto com fezes de hospedeiros infectados. O objetivo neste estudo foi avaliar a utilização dos anticorpos IgY policlonais em um ELISA de captura para detecção de antígenos solúveis de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bovinos, comparativamente à análise microscopica para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. (padrão-ouro). Um total de 214 amostras foram colhidas e submetidas as análises. Do total de 214 amostras, 17,29% (37/214) foram positivas para Cryptosporidium spp. pela microscopia. Pelo ELISA (Ensaio de Imunoadsorção Enzimática) de captura foi possível detectar 20,09% (43/214) de amostras reagentes para antígenos fecais de Cryptosporidium parvum. Pelo teste Kappa, foi observado uma excelente concordância (0.9079). Por meio do teste de McNemar houve diferença significativa entre a proporção de resultados positivos entre as duas técnicas usadas (p<0,05). Uma vez que o requisito principal avaliado foi a sensibilidade do teste, os melhores resultados foram obtidos adicionando a curva ROC, com ponto de corte em 0.4315, onde foram observados sensibilidade de 100% e especificidade de 95,6%. Assim, o uso do anticorpo monoclonal anti-peptídeo da proteína GP15 em conjunto com o anticorpo IgY policlonal anti-oocistos rompidos no ELISA de captura permitiu a determinação de amostras positivas para C. parvum.

Cryptosporidium spp. are coccid protozoa that infect a wide variety of vertebrates. The transmission occurs in fecal-oral form and often due to the ingestion of contaminated water and food or by indirect or direct contact with feces from infected hosts. The objective of this study was to evaluate the use of polyclonal IgY in a sandwich ELISA for the detection of soluble Cryptosporidium parvum antigens in bovine fecal samples, compared to the microscopic analysis for the detection of Cryptosporidium spp.oocysts (gold standard). A total of 214 samples were collected and submitted to analysis. The results from microscopic analysis revealed that 17.29% (37/214) were positive for Cryptosporidium spp.. The sandwich ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) detected 20.09% (43/214) of positivity for Cryptosporidium parvum fecal antigens. The Kappa test showed an excellent agreement (0.9079). Through the McNemar test, there was a significant difference in the proportion of positive results between the two techniques (p <0.05). Since the main requirement was the sensitivity of the test, the best results were observed by adding the ROC curve with a cut-off point of 0.4315, where 100% of sensitivity and 95.6% of specificity were observed. Thus, the use monoclonal antibody anti-GP15 protein peptide in conjunction with polyclonal IgY anti-oocyst antibody in sandwich ELISA allowed the determination of C. parvum positive samples.