Validação de imunossensor para detecção da hemorragia feto – materna (HFM)

Abstract

A hemorragia feto-materna (HFM) é definida como a passagem de sangue fetal para a circulação materna. Pode ocorrer por distúrbios na barreira placentária, seja por traumas ou condições que levem a anormalidades placentárias, sendo responsável pela alossensibiliza-ção do sistema imunológico materno, levando a morbimortalidade de gestação corrente ou futura constituindo a base da etiopatogenia das condições, como visto na doença hemolítica perinatal que expõe a complicações fetais como hidropisia, danos cerebrais hipóxicos e mor-te. A detecção e quantificação de hemácias fetais na circulação materna se faz necessária para prevenir suas consequências, tanto para a mãe quanto para o feto. Tendo em vista a im-portância do diagnóstico laboratorial, foi validado imunossensor para detecção de amostras de sangue fetal utilizando anticorpos monoclonais comerciais anti-hemoglobina fetal huma-na e anti-CD71 associados a uma matriz de imobilização, fibroína da seda, pela técnica la-yer-by-layer na montagem dos filmes em eletrodo interdigitado de ouro utilizando medidas de espectroscopia de impedância elétrica, que é sensível para este tipo de detecção. A pre-sente pesquisa também propôs, em paralelo, a obtenção de anticorpo monoclonal murino contra proteína específica dirigida contra hemácias fetais, antígeno - i, por meio de imuniza-ção subtrativa. Para validação do imunossensor, a análise foi reproduzida com amostras de sangue de cordão umbilical e amostras de sangue periférico adulto, tendo como prova de conceito a validação das amostras pela técnica de citometria de fluxo. Os dados obtidos fo-ram promissores, a proposta de inovação foi depositada em patente, o estudo também obteve um clone célula secretor de anticorpos com especificidade característica contra hemácias fetais. A tecnologia produzida necessita de padronização na leitura dos dados para que possa ser utilizada como tecnologia point-of-care, enquanto o anticorpo monoclonal produzido necessita ser caracterizado por proteômica para confirmar sua especificidade e então ser uti-lizado como produto diagnóstico. Os produtos obtidos têm potencial para uso na determina-ção de HFM.

Feto-maternal hemorrhage (FMH) is defined as the passage of fetal blood into the maternal circulation. It can occur due to disturbances in the placental barrier, either due to trauma or conditions that lead to placental abnormalities, being responsible for allosensitiza-tion of the maternal immune system, leading to morbidity and mortality of current or future pregnancy, constituting the basis of the etiopathogenesis of conditions, as seen in perinatal hemolytic disease which exposes them to fetal complications such as hydrops, hypoxic brain damage and death. The detection and quantification of fetal red blood cells in maternal cir-culation is necessary to prevent its consequences, both for the mother and for the fetus. In view of the importance of laboratory diagnosis, an immunosensor was validated for the de-tection of fetal blood samples using commercial anti-human fetal hemoglobin and anti-CD71 monoclonal antibodies associated with an immobilization matrix, silk fibroin, using the la-yer-by-layer technique. in the mounting of films on interdigitated gold electrode using elec-trical impedance spectroscopy measurements, which is sensitive for this type of detection. The present research also proposed, in parallel, to obtain a murine monoclonal antibody aga-inst a specific protein directed against fetal red blood cells, antigen - i, through subtractive immunization. For validation of the immunosensor, the analysis was reproduced with sam-ples of umbilical cord blood and samples of adult peripheral blood, with the validation of the samples using the flow cytometry technique as proof of concept. The data obtained were promising, the innovation proposal was deposited in patent, the study also obtained a cell clone secreting antibodies with characteristic specificity against fetal red blood cells. The technology produced needs standardization in data reading so that it can be used as a point-of-care technology, while the monoclonal antibody produced needs to be characterized by proteomics to confirm its specificity and then be used as a diagnostic product. The products obtained have potential for use in the determination of HFM.