Padronização da metodologia de pcr em tempo real para avaliação da expressão gênica da proteína dash de Histoplasma capsulatum

A histoplasmose é uma micose sistêmica, com características de doença granulomatosa com predileção pelo pulmão e órgãos do sistema imunológico e é causada pelo fungo Histoplasma capsulatum. Uma extensa diversidade de fungos patogênicos tem demonstrado a habilidade em colonizar superfícies e formar biofilmes, sendo a maior causa para resistência de infecções humanas. Existem diferentes perfis de expressão de proteínas por H. capsulatum quando comparado seu crescimento em culturas planctônicas e biofilmes. Desta forma, dando continuidade aos trabalhos realizados, nosso grupo propõe realizar a análise quantitativa da expressão do gene codificante da proteína DASH diferencialmente expressa por H. capsultaum durante a formação de biofilmes, a fim de selecionar alvos e/ou biomarcadores da interação fungo-células hospedeiras. Para a realização do estudo foi selecionada a cepa EH-315 de H. capsulatum. Após a formação dos biofilmes, as amostras de RNA foram obtidas por meio de extração com o reagente Trizol e com o kit da Qiagen RNeasy Plant Mini Kit®. Após a síntese e quantificação de cDNA, foi realizada a PCR em Tempo Real, sendo selecionado o gene codificante da proteína DASH para ter sua expressão avaliada nas diferentes condições de crescimento de H. capsulatum, em biofilmes e culturas planctônicas. Os resultados obtidos após quantificação do RNA extraído de cultura planctônica e biofilme da cepa EH-315 de H. capsulatum mostram que não foi obtida uma grande quantidade de produto e que sua pureza, se mostra comprometida. Apesar dos resultados do nosso estudo não permitirem a continuidade do processo de análise de expressão gênica, ele ainda assim teve relevância ao pontuar possíveis falhas no processo de extração de RNA.

Palavras-chave

Histoplasmose Biofilme Micoses Histoplasmosis

Idioma

Português

Citação

SATO, Leticia Sumie. Padronização da metodologia de pcr em tempo real para avaliação da expressão gênica da proteína dash de Histoplasma capsulatum. 2015. 74 f. , 2015.