Identificação de Neutrophil Extracellular Traps em lesões tegumentares de pacientes com Paracoccidiodomicose e análise da formação de NETs in vitro por neutrófilos humanos desafiados com Paracoccidioides brasiliensis
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Data
2014-12-10
Autores
Coletta, Amanda Manoel Della [UNESP]
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Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
Paracoccidiodomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis in Latin America, is caused by the thermodimorphic fungus of Paracoccidioides genus (Paracoccidioides brasiliensis (Pb) and Paracoccidoides lutzii). Recently, works in PCM have focused the role of neutrophils (PMNs), since literature has demonstrated the dynamic involvement of these cells in host defense against microorganisms. Studies have shown that PMNs could use a novel strategy to destroy microorganisms (NETosis), a type of neutrophil death distinct from apoptosis and necrosis. This mechanism involves the release of extracellular traps by activated neutrophils, known as neutrophil extracellular traps (NETs). It has been proposed that NETs may destroy microorganisms that were not phagocytosed by neutrophils, and this could be proposed for Pb, since the fungus yeast can present different sizes. In this context, the objectives of this study were identify the presence of NETs in vivo and in vitro, analyzing samples of patients with PCM by different methodologies. Tissue sections from formalin-fixed biopsies were stained with DAPI, anti-elastase (FITC) and anti-histone (Texas-Red) for confocal immunofluorescence microscopy analysis, and with Hematoxylin-Eosin (H&E) for histopathology. Neutrophil cultures were challenged with two isolates of Pb (Pb18 and Pb265), analyzed by scanning electron microscopy and NETs were quantified by the Picogreen dsDNA kit. The images revealed the presence of NETs constituents, nuclear and extracellular localization of DNA, co-localization of elastase and histone, confirmed by the overlay of the three stains. Histopathology showed the presence of Pb and inflammatory infiltrate with high number of neutrophils on the site of the lesion and extracellular DNA (hematoxylin positive) indicating NETs. Both isolates were able to induce NET release in vitro in similar levels. Thus, P. brasiliensis (Pb18 and Pb265) is able to induce NETs formation by ...
Paracocciodioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada por fungo dimórfico do gênero Paracoccidioides (Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii), sendo endêmica na América Latina. Nos últimos anos, estudos têm enfocado o papel dos neutrófilos (PMNs) na imunidade, uma vez que a literatura enfatiza o dinâmico envolvimento dessas células durante a defesa do hospedeiro contra diversos micro-organismos. Recentemente, foi demonstrado que neutrófilos podem utilizar uma nova estratégia para destruir patógenos chamada NETose, um tipo de morte celular diferente dos bem elucidados mecanismos de apoptose e necrose. Essa via envolve a liberação de redes extracelulares constituídas de conteúdo nuclear e granular por PMNs ativados. É proposto que as NETs destruam micro-organismos que não sejam fagocitados pelos neutrófilos, por possuírem tamanho ou morfologia maiores que as células, o que pode ocorrer com o Pb, uma vez que esse fungo assume essas características. Nesse contexto, os objetivos desse estudo foram identificar a presença das NETs tanto in vivo como in vitro, analisando lesões tegumentares de pacientes com PCM e culturas de PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis desafiados com diferentes cepas de P. brasiliensis. Fragmentos de biópsias foram marcados com anticorpos anti-histona (Texas-Red), anti-elastase (FITC), e corados com DAPI para avaliação por microscopia confocal, e com H&E para análise histopatológica. PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis foram isolados e desafiados com P. brasiliensis (Pb18 e Pb265) para avaliação de NETs por microscopia de varredura, microscopia confocal e quantificação dessas estruturas por Picogreen dsDNA kit. As imagens de microscopia confocal das biópsias revelaram a presença de constituintes das NETs, localização de DNA extracelular corado com DAPI, com ...
Paracocciodioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada por fungo dimórfico do gênero Paracoccidioides (Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii), sendo endêmica na América Latina. Nos últimos anos, estudos têm enfocado o papel dos neutrófilos (PMNs) na imunidade, uma vez que a literatura enfatiza o dinâmico envolvimento dessas células durante a defesa do hospedeiro contra diversos micro-organismos. Recentemente, foi demonstrado que neutrófilos podem utilizar uma nova estratégia para destruir patógenos chamada NETose, um tipo de morte celular diferente dos bem elucidados mecanismos de apoptose e necrose. Essa via envolve a liberação de redes extracelulares constituídas de conteúdo nuclear e granular por PMNs ativados. É proposto que as NETs destruam micro-organismos que não sejam fagocitados pelos neutrófilos, por possuírem tamanho ou morfologia maiores que as células, o que pode ocorrer com o Pb, uma vez que esse fungo assume essas características. Nesse contexto, os objetivos desse estudo foram identificar a presença das NETs tanto in vivo como in vitro, analisando lesões tegumentares de pacientes com PCM e culturas de PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis desafiados com diferentes cepas de P. brasiliensis. Fragmentos de biópsias foram marcados com anticorpos anti-histona (Texas-Red), anti-elastase (FITC), e corados com DAPI para avaliação por microscopia confocal, e com H&E para análise histopatológica. PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis foram isolados e desafiados com P. brasiliensis (Pb18 e Pb265) para avaliação de NETs por microscopia de varredura, microscopia confocal e quantificação dessas estruturas por Picogreen dsDNA kit. As imagens de microscopia confocal das biópsias revelaram a presença de constituintes das NETs, localização de DNA extracelular corado com DAPI, com ...
Descrição
Palavras-chave
Pele - Ferimentos e lesões, Paracoccidioides brasiliensis, Microscopia confocal, Neutrofilos, Microscopia eletronica de varredura, Histopatologia
Como citar
COLETTA, Amanda Manoel Della. Identificação de Neutrophil Extracellular Traps em lesões tegumentares de pacientes com Paracoccidiodomicose e análise da formação de NETs in vitro por neutrófilos humanos desafiados com Paracoccidioides brasiliensis. 2014. 82 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Faculdade de Medicina de Botucatu, 2014.