Publicação: Germinação de sementes e conservação de orquídeas nativas das Américas
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Data
Orientador
Pivetta, Kathia Fernandes Lopes 
Vendrame, Wagner Aparecido
Sorgato, José Carlos
Coorientador
Pós-graduação
Agronomia (Produção Vegetal) - FCAV
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
A propagação in vitro e conservação ex situ, são técnicas, que podem ser aprimoradas através da escolha adequada da fonte luminosa, das formulações do meio de cultivo e de crioprotetores. O presente estudo teve por objetivos: (i) estudar fontes de luz a partir de lâmpadas fluorescentes e diodos emissores de luz (LEDs) e formulações de meio de cultivo na germinação e no desenvolvimento inicial da espécie de orquídea Brassavola perrinii e (ii) avaliar a eficiência da solução vitrificante (PVS2) combinada ao floroglucinol 1% em nitrogênio líquido para a criopreservação de sementes maduras das espécies Encyclia cordigera e Epidendrum ciliare. Os experimentos foram instalados em delineamento inteiramente casualizado e ambos foram duplicados. No primeiro os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 5x4 com cinco condições de luz: LF - lâmpada fluorescente; LB - LED branco; LA - LED azul; LV- LED vermelho e LAV – LED azul (50%) e vermelho (50%) e quatro formulações de meio de cultivo (MS, ½MS, VW e K), com quatro repetições e média de 125 sementes por parcela. Aos 90 dias após a semeadura foram avaliadas a porcentagem de germinação, de protocormos clorofilados e o desenvolvimento dos protocormos através das classes: P1, P2, P3 e P4 para cálculo do índice de desenvolvimento protocormos. No segundo experimento foram oito tratamentos: 1) germinação in vitro direta; 2) imersão direta em nitrogênio líquido, sem crioprotetores; 3) PVS2 por 60 min; 4) PVS2 por 120 min; 5) PVS2 por 180 min; 6) PVS2 + floroglucinol1% por 60 min; 7) PVS2 + floroglucinol1% por 120 min; 8) PVS2 + floroglucinol1% por 180 min, com cinco repetições e média de 120 sementes por parcela. Imersão em nitrogênio líquido, à temperatura de -196 C por 72 horas. Foram avaliadas a viabilidade e a porcentagem de germinação das sementes, antes e após a aplicação dos tratamentos. Aos 45 dias após a recuperação da criopreservação foi avaliado o desenvolvimento dos protocormos através das classes morfológicas P1, P2 e P3. Os dados foram submetidos à análise de variância e aqueles com valor percentual foram previamente transformados em arco-seno (x/100)1/2. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey p0,05. Para B. perrinii, concluiu-se que o percentual de germinação não foi influenciado pelos espectros de luz, mas foi maior nas formulações ½ MS e VW. O maior índice de desenvolvimento dos protocormos de B. perrinii foi observado quando submetidos ao espectro de luz da fonte de iluminação com lâmpadas fluorescentes em meio de cultivo Vacin e Went. A utilização da solução vitrificante (PVS2) combinado ao floroglucinol 1% foi eficiente na recuperação de sementes criopreservadas em nitrogênio líquido, elevou a porcentagem de germinação e desenvolvimento dos protocormos para as duas espécies em estudo. Os resultados observados indicam o uso de PVS2 combinado com floroglucinol 1% por 60 min para a criopreservação de sementes de E. cordigera, e PVS2 com floroglucinol 1% por 180 min para sementes de E. ciliare. O presente estudo também indica que a resposta à criopreservação após o armazenamento à frio é específica da espécie e requer ajustes no tempo de exposição ao PVS2 a 0 °C antes da imersão em nitrogênio líquido.
Resumo (inglês)
In vitro propagation and ex situ conservation, are techniques that can be improved through the appropriate choice of light source, formulations of the culture medium and cryoprotectants. The aims this work was: (i) study the effect of light sources from fluorescent lamps and light-emitting diodes (LEDs) and cultivation medium formulations on the germination and initial development of Brassavola perrinii orchid and (ii) evaluate the efficiency of the vitrify solution (PVS2) combined with phloroglucinol 1% in liquid nitrogen for the cryopreservation of mature seeds of the species Encyclia cordigera and Epidendrum ciliare. The experiments were installed in a completely randomized design and both were duplicated. In the first, the treatments were arranged in a 5x4 factorial scheme with five light conditions: LF - fluorescent lamp; LB - white LED; LA - blue LED; LV- Red LED and LAV - Blue LED (50%) and red (50%), and four cultivation medium formulations (MS, ½MS, VW and K), with four replications and an average of 125 seeds per plot. At 90 days after sowing, the percentage of germination, of chlorophyll protocorms and the development of protocorms through the classes: P1, P2, P3 and P4 to calculate the protocorms development index. In the second experiment, there were eight treatments: 1) direct in vitro germination; 2) direct immersion in liquid nitrogen, without cryoprotectants; 3) PVS2 for 60 min; 4) PVS2 for 120 min; 5) PVS2 for 180 min; 6) PVS2 + floroglucinol1% for 60 min; 7) PVS2 + floroglucinol1% for 120 min; 8) PVS2 + floroglucinol1% for 180 min, respectively), with five repetitions and an average of 120 seeds per plot. Immersion in liquid nitrogen, at a temperature of -196 C for 72 hours. Viability was evaluated using the tetrazolium test, and the germination percentage of the seeds, before and after the application of the treatments. 45 days after the recovery of cryopreservation, the development of the protocorms was evaluated through the morphological classes P1, P2 and P3. The data were submitted to analysis of variance and those with percentage values were previously transformed into arc sine (x/100)1/2. The means were compared using the Tukey test p0,05. For B. perrinii, he concluded that the germination percentage was not influenced by the light spectra but was higher in the ½ MS and VW formulations. The highest rate of development of B. perrinii protocormos was observed when using the light spectrum of the light source with fluorescent lamps in the Vacin and Went culture medium. The use of the vitrify solution (PVS2) combined with phloroglucinol 1% was efficient in the recovery of cryopreserved seeds in liquid nitrogen, increasing the percentage of germination and development of protocorms for the two species under study. The observed results indicate the use of PVS2 combined with 1% floroglucinol for 60 min for the cryopreservation of E. cordigera seeds, and PVS2 with 1% phloroglucinol for 180 min for E. ciliare seeds. The present study also indicates that the response to cryopreservation after cold storage is species-specific and requires adjustments in the time of exposure to PVS2 at 0 ° C before immersion in liquid nitrogen.
Descrição
Palavras-chave
Criopreservação, Fontes de luz, Meio de cultivo, Protocormo, Semeio in vitro, Solução pré-vitrificante, Cryopreservation, Light sources, Culture medium, Protocorm, In vitro sowing, Pre-vitrification solution
Idioma
Português
