Identificação de marcadores de resistência e suscetibilidade em casais discordantes na infecção por SARS-CoV-2
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Data
2022-12-14
Autores
Ferreira, Thayná Ruiz
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Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
O sistema imunológico é essencial para controlar e eliminar patógenos como o SARS-CoV-2, agente da COVID-19 que vem sendo transmitida desde dezembro de 2019. Fatores como o uso adequado de máscaras e outras medidas de proteção individual, status socioeconômico, e acesso aos serviços de saúde são algumas variáveis que podem explicar a variação de incidência e mortalidade da doença entre os indivíduos expostos. A determinação de possíveis diferenças de resposta entre indivíduos expostos à mesma cepa viral em casais discordantes para a infecção pode representar um caminho importante para um melhor entendimento das respostas dos infectados. Assim, focando a resposta de neutrófilos de casais que tiveram diagnóstico positivo e negativo para COVID-19, objetivamos identificar e avaliar após diferentes estímulos: a expressão de receptores ACE2, TLR4 e TLR9; a produção de diferentes citocinas em sobrenadante; e a liberação de NETs, em busca de possíveis marcadores de resistência e suscetibilidade. Um recrutamento foi realizado através de formulário online com inclusão de casais com diagnóstico discordante confirmado por teste molecular, e que tenham se infectado antes do recebimento das doses da vacinação. A coleta de sangue venoso periférico foi realizada para o isolamento de neutrófilos e agonistas de TLRs (LPS e ODN CpG) e SARS-CoV-2 inativado foram utilizados para desafio destas células. A detecção das expressões de ACE2, TLR4 e TLR9 foi realizada utilizando diferentes anticorpos conjugados a fluorocromos por citometria de fluxo. A liberação de NETs séricas e em sobrenadante de cultura foi quantificada com auxílio do kit Quant-iT™ PicoGreen™ dsDNA Assay e anticorpo anti-elastase. O kit LEGENDplex™ Human Essential Immune Response Panel (13-plex) foi utilizado para quantificação de citocinas em sobrenadante. A análise estatística foi realizada considerando nível de significância de 5%, de acordo com a distribuição dos dados e com auxílio do SAS Analytics Software e GraphPad Prism 6. Após os estímulos encontramos algumas diferenças de respostas entre os casais. Foram detectadas variações de neutrófilos ACE2+. Quando as células dos indivíduos COVID-19 negativo foram estimuladas com ODN CpG, a porcentagem aumentou e foi superior aos indivíduos positivos. Além disso, esse grupo apresentou as maiores porcentagens de neutrófilos TLR4+ sem estímulo e após SARS-CoV-2 inativado. Apesar disso, neutrófilos do grupo COVID-19 positivo apresentaram níveis de TLR4 mais elevados. Para a expressão de TLR9, esse comportamento é invertido quando estimulado com SARS-CoV-2 inativado. Em relação à liberação de NETs, neutrófilos do COVID-19 positivo produziram mais NETs (mesmo sem a infecção aguda), principalmente em níveis séricos e sem estímulo. Após estímulos, COVID-19 negativo apresentou os níveis mais altos comparativamente e também são capazes de produzir mais IL-8. Assim, há uma indicação de diferença de resposta entre neutrófilos pertencentes a diferentes grupos que podem representar alguns fatores de resistência e suscetibilidade à infecção por SARS-CoV-2.
The immune system is essential to control and eliminate pathogens such as SARS-CoV-2, the agent of COVID-19 that has been transmitted since December 2019. Factors such as the proper use of masks and other personal protective measures, socioeconomic status, and access to health services are some variables that can explain the variation in incidence and mortality of the disease among exposed individuals. Determination of possible differences in response between individuals exposed to the same viral strain in discordant couples for the infection may represent an important path to a better understanding of the responses of those infected. Thus, focusing on the neutrophil response of couples who had a positive and negative diagnosis for COVID-19, we aimed to identify and evaluate after different stimuli: ACE2, TLR4 and TLR9 receptors expression; cytokines production in supernatant; and NETs release, in search of possible resistance and susceptibility markers. After the stimuli, we found some differences in responses between the couples. Variations of ACE2+ neutrophils were detected. When COVID-19 negative cells were stimulated with ODN CpG, the percentage was increased, being higher than positive individuals. Furthermore, these individuals have higher percentages of TLR4+ neutrophils without stimulation and after stimulation with inactivated SARS-CoV-2. Despite this, COVID-19 positive have higher expression of TLR4+ in neutrophils. For TLR9 expression, this behavior is reversed when stimulated with inactivated SARS-CoV-2. Regarding NETs release, COVID-19 positive neutrophils produced more NETs (even without being acutely infected) mainly at serum levels and in culture without stimulation. After stimulation, COVID-19 negative have the highest levels comparatively and are also able to produce more IL-8. Thus, there is a difference indication of response between neutrophils belonging to different groups that may represent some resistance and susceptibility factors to SARS-CoV-2 infection.
The immune system is essential to control and eliminate pathogens such as SARS-CoV-2, the agent of COVID-19 that has been transmitted since December 2019. Factors such as the proper use of masks and other personal protective measures, socioeconomic status, and access to health services are some variables that can explain the variation in incidence and mortality of the disease among exposed individuals. Determination of possible differences in response between individuals exposed to the same viral strain in discordant couples for the infection may represent an important path to a better understanding of the responses of those infected. Thus, focusing on the neutrophil response of couples who had a positive and negative diagnosis for COVID-19, we aimed to identify and evaluate after different stimuli: ACE2, TLR4 and TLR9 receptors expression; cytokines production in supernatant; and NETs release, in search of possible resistance and susceptibility markers. After the stimuli, we found some differences in responses between the couples. Variations of ACE2+ neutrophils were detected. When COVID-19 negative cells were stimulated with ODN CpG, the percentage was increased, being higher than positive individuals. Furthermore, these individuals have higher percentages of TLR4+ neutrophils without stimulation and after stimulation with inactivated SARS-CoV-2. Despite this, COVID-19 positive have higher expression of TLR4+ in neutrophils. For TLR9 expression, this behavior is reversed when stimulated with inactivated SARS-CoV-2. Regarding NETs release, COVID-19 positive neutrophils produced more NETs (even without being acutely infected) mainly at serum levels and in culture without stimulation. After stimulation, COVID-19 negative have the highest levels comparatively and are also able to produce more IL-8. Thus, there is a difference indication of response between neutrophils belonging to different groups that may represent some resistance and susceptibility factors to SARS-CoV-2 infection.
Descrição
Palavras-chave
SARS-CoV-2, Casais discordantes, NETs, ACE2, TLRs, COVID-19 (Doença), Equipamento de proteção individual, Receptores de citocinas, Citocinas, Máscaras, SARS-CoV-2