Avaliação da técnica de hemocultura pela reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os iniciadores P35/P36 e TCZ1/TCZ2 para a detecção de Trypanosoma cruzi em cães e gatos

Abstract

A doença de Chagas é uma zoonose, causada pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi), afetando também espécies de animais silvestres e domésticos. Os cães e os gatos têm grande importância no ciclo de transmissão deste parasita, sendo considerados os principais reservatórios domésticos e fontes de infecção de tripanossomatídeos, devido a sua grande proximidade com o homem, sua boa susceptibilidade à infecção chagásica e por atraírem o vetor. Dentre os métodos diagnósticos, a hemocultura representa um teste parasitológico cuja positividade demonstra a presença do parasito na corrente sanguínea. Esta é uma diferença importante em relação à técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), considerada como padrão ouro, a qual possui capacidade de detectar fragmentos do parasita, não necessitando este estar presente inteiro na circulação. O presente estudo objetivou avaliar a ocorrência de T. cruzi em cães e gatos procedentes de Botucatu-SP e Campo Grande-MS, bem como avaliar a técnica de hemocultura em meio LIT (Liver Infusion Tryptose) utilizandose a técnica de PCR, além de comparar os iniciadores P35/P36 e TCZ1/TCZ2 na detecção do T. cruzi pela PCR. Foram colhidas aleatoriamente amostras de sangue de 50 cães e 50 gatos procedentes de Campo Grande-MS e de 50 cães e 50 gatos procedentes de Botucatu- SP. Para a hemocultura, cada amostra foi inoculada em três tubos, contendo 5 mL de meio LIT em cada. A primeira leitura das culturas foi após dez dias, sendo posteriormente observadas quinzenalmente, durante quatro meses. Ao término deste, todas as hemoculturas foram processadas para a extração do DNA parasitário. As reações de PCR foram realizadas utilizando-se os iniciadores P35/P36 e TCZ1/TCZ2. Das 100 amostras de Botucatu-SP, dez cães e dez gatos (20%) foram positivos à PCR (tanto para os iniciadores P35/P36, quanto para os iniciadores TCZ1/TCZ2),...

Chagas disease is a zoonosis caused by Trypanosoma cruzi (T. cruzi) which also affects household and wild animal species. Dogs and cats play an important role in this parasite’s transmission cycle and they are considered to be the main household reservoirs as well as sources of infection with trypanosomatids due to their closeness to men, their good susceptibility to chagasic infection and the fact that they attract the vector. Among diagnostic methods, hemoculture represents a parasitological test whose positivity shows the parasite’s presence in the blood stream. This is an important difference in relation to the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, which is regarded as gold standard and capable of detecting fragments of the parasite, thus not requiring the presence of whole organisms in the blood stream. The present study aimed at evaluating the occurrence of T. cruzi in dogs and cats from Botucatu - SP and Campo Grande - MS as well as at evaluating the technique of hemoculture in LIT (Liver Infusion Tryptose) medium by using the PCR technique, in addition to comparing primers P35/P36 and TCZ1/TCZ2 in the detection of T. cruzi by PCR. Blood samples were randomly collected from 50 dogs and 50 cats from Campo Grande - MS and from 50 dogs and 50 cats from Botucatu - SP. For hemoculture, each sample was inoculated into three tubes containing 5 mL of the LIT medium each. The first reading of the cultures occurred ten days later, and they were later observed fortnightly for four months. Upon completion of such period, all the hemocultures were processed for parasitic DNA extraction. The PCR reactions were performed by using primers P35/P36 and TCZ1/TCZ2. Of the 100 samples from Botucatu - SP, ten dogs and ten cats (20%) were positive to PCR (both for primers P35/P36 and for primers TCZ1/TCZ2). Four dogs and three cats (7%) showed to be positive to hemoculture, and one cat ...(Complete abstract click electronic access below)