Avaliação da atividade antiviral de peptídeos sintéticos contra o Zika vírus
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Data
2023-02-24
Autores
Orientador
Rahal, Paula 
Coorientador
Pós-graduação
Microbiologia - IBILCE
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
O Zika vírus (ZIKV) é um arbovírus pertencente à família Flaviviridae, genêro Flavivirus. Teve seu primeiro caso de transmissão autóctone relatado no Brasil em 2015 e, nesse mesmo período, espalhou-se para outros países e casou um grande surto nas Américas. A infecção por ZIKV é, em sua maioria, assintomática ou possui sintomas leves, porém esse vírus é capaz de causar complicações que envolvem alterações neurológicas, causando um impacto significativo na saúde pública. Uma delas é a Síndrome Congênita do Zika em bebês de mulheres infectadas durante à gestação. Além disso, esse vírus pode causar a Síndrome de Guillain-Barré em adultos. Atualmente, não há vacinas ou medicamentos específicos para o ZIKV, fazendo-se necessário a busca pelos mesmos. Na procura por novas terapêuticas, peptídeos tem se mostrado moléculas com grande potencial para essa finalidade, inclusive na busca por antivirais, já que tem sido observado que fazem inibição seletiva e apresentado relativas tolerabilidade e segurança. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antiviral dos peptídeos sintéticos AG-peptídeo (GA-KKALKKLKKALKKAL-CONH2) e (pBthTX-I)2K [(KKYRYHLKPFCKK)2] em células Vero infectadas pelo ZIKV. Para isso, primeiramente foi avaliada a citotoxicidade dos peptídeos nessas células por meio do ensaio de MTT, tendo sido determinada a máxima concentração não-tóxica de 25µM para ambos os peptídeos, e foi esta a concentração utilizada para os ensaios antivirais. Foi então realizado um ensaio de triagem a fim de avaliar se os peptídeos possuíam efeito antiviral contra o ZIKV. O AG-peptídeo demonstrou inibição de 88,57% dos níveis de RNA viral e para o (pBthTX-I)2K foi de 67,28%. Confirmada a atividade antiviral, foram realizados ensaios para compreender em que etapas do ciclo replicativo os peptídeos estão agindo. Ambos os peptídeos mostraram proteger as células Vero contra a infecção por ZIKV. O AG-peptídeo apresentou efeito virucida e também atuou inibindo a entrada de ZIKV nas células, especificamente as etapas de adsorção e internalização. Finalmente, tanto o AG-peptídeo quanto o (pBthTX-I)2K foram capazes de inibir o ZIKV em etapas pós-entrada nas células Vero. Em conclusão, ambos os peptídeos se mostraram potenciais antivirais contra o ZIKV in vitro, sendo que o AG-peptídeo teve ação em todas as etapas do ciclo replicativo viral analisadas no presente trabalho, enquanto o (pBthTX-I)2K foi capaz de proteger as células Vero da infecção por ZIKV e atuar nas etapas após a entrada viral nas células. Apesar de mais ensaios são necessários para determinar o mecanismo de ação desses peptídeos, o presente trabalho demonstrou moléculas com grande potencial para o desenvolvimento de antivirais contra o ZIKV.
Resumo (inglês)
Zika virus (ZIKV) is an arbovirus with a positive-sense single-stranded RNA genome which belongs to the Flaviviridae family, genus Flavivirus. It had its first case of autochthonous transmission reported in Brazil in 2015, and in the same period, it spread to other countries and caused a large outbreak in the Americas. ZIKV infection is majority asymptomatic or has mild symptoms, but this virus is capable of causing complications involving neurological alterations, causing a significant impact on public health. Congenital Zika Syndrome is one of them and can occur in babies of women infected during pregnancy. Furthermore, this virus can cause Guillain-Barré Syndrome in adults. Currently, there are no vaccines or specific drugs for ZIKV, making it necessary to search for them. In the seeking for new therapies, peptides have shown to be molecules with great potential for this purpose, including the search for antivirals, since it has been observed that they perform selective inhibition and present relative tolerability and safety. In this context, this work aimed to evaluate the antiviral potential of the synthetic peptides GA-peptide (GA-KKALKKLKKALKKAL-CONH2) and (pBthTX-I)2K [(KKYRYHLKPFCKK)2] in Vero cells infected with ZIKV. For this, the cytotoxicity of the peptides in these cells was first evaluated using the MTT assay, and the maximum non-toxic concentration was 25µM for both peptides, which was the concentration used for antiviral assays. Then, a screening assay was performed to assess whether the peptides had an antiviral effect against ZIKV. GA-peptide demonstrated inhibition of 88.57% of viral RNA levels, and for (pBthTX-I)2K it was 67.28%. Once confirmed the antiviral activity some experiments were carried out to understand which stages of the replicative cycle the peptides are acting. Both peptides were capable to protect Vero cells against ZIKV infection. GA-peptide exhibited a virucidal effect and inhibited the entry of ZIKV into cells, specifically in attachment and internalization steps. Finally, both GA-peptide and (pBthTX-I)2K were able to inhibit ZIKV in post-entry steps in Vero cells. Concluding, both peptides exhibited antiviral potential against ZIKV in vitro. The GA-peptide had action in all stages of the viral replicative cycle analyzed in the present work, while (pBthTX-I)2K was able to protect Vero cells from ZIKV infection and act in the steps after viral entry into cells. Even though more assays are needed to determine the mechanism of action of these peptides, this work brought molecules with great potential to the development of antivirals against ZIKV.
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Idioma
Português