Avaliação do bandeamento cromossômico por digestão enzimática e tratamento com solução tampão citratado

Abstract

Human Cytogenetics is the study of chromosomes, their structure and their inheritance, applied to the practice of medical genetics. For nearly fifty years the chromosomal abnormalities, microscopically visible changes in the number and / or structure of chromosomes, may be responsible for a number of clinical conditions known as chromosomal aberrations, which are a category of constitutional or acquired genetic diseases. Several amendments were described in genetic diseases and neoplastic diseases of hematologic origin, aiding in the diagnosis, prognosis, classification and monitoring of the disease. The aim of this study was to standardize the classical technique in cytogenetics by evaluating the banding G by enzymatic digestion with trypsin and by denaturation with citrate buffer at high temperature, assisting in the karyotype view. In this study we used peripheral blood samples of normal individuals. Cell culture was performed by culturing in situ method, following the method of Moorhead et al. modified (1960). In all cases appropriate metaphases were obtained for analysis and the mitotic index was satisfactory. The results obtained by using different chromosome banding techniques revealed that the G banding by the enzymatic action of the trypsin although considered the gold standard it is more sensitive, cumbersome and it occurs with a larger number of retries due to a variability of the time for degradation of the proteins, requiring rework, this way becoming inefficient in samples with low mitotic index and consequently increasing the cost of the exam. While the banding technique using citrate buffer in high temperature is simple, productive, agile and less expensive

A Citogenética humana é o estudo dos cromossomos, sua estrutura e sua herança, aplicado à prática da genética médica. Há quase 50 anos as anomalias cromossômicas, alterações microscopicamente visíveis no número e/ou na estrutura dos cromossomos, podem ser responsáveis por uma série de condições clínicas denominadas aberrações cromossômicas, que constituem uma categoria de doenças genéticas constitucionais ou adquiridas. Diversas alterações foram descritas em doenças genéticas e doenças neoplásicas de origem hematológica, auxiliando no diagnóstico, prognostico, classificação e monitoramento da doença. O objetivo do presente estudo foi padronizar a técnica clássica em citogenética através da avaliação do bandeamento G pela digestão enzimática com tripsina e pela desnaturação com tampão citratado em alta temperatura, auxiliando na visualização do cariótipo. Neste estudo utilizamos amostras de sangue periférico de indivíduos normais. A cultura celular foi realizada pelo método de cultura in situ, seguindo a metodologia de Moorhead et al. modificada (1960). Em todos os casos foram obtidas metáfases adequadas para análise e o índice mitótico foi satisfatório. Os resultados obtidos pelo emprego de diferentes técnicas de bandeamento cromossômico revelaram que o bandeamento G pela ação enzimática da tripsina embora considerado padrão-ouro é mais sensível, trabalhoso e ocorre com um número maior de tentativas devido a variabilidade do tempo para que ocorra a degradação das proteínas, sendo necessário o retrabalho tornando-se ineficiente em amostras com baixo índice mitótico e aumentando consequentemente o custo do exame. Enquanto o bandeamento pela técnica utilizando tampão citratado em alta temperatura é simples, produtivo, ágil e de menor custo