Prospecção de terapia epigenética com inibidores de Histona Deacetilase (HDACi) para câncer cervical associado ao Papilomavírus Humano (HPV)

Abstract

O câncer cervical é o quarto tipo de câncer mais comum em mulheres. Este câncer está majoritariamente associado à infecção persistente por tipos oncogênicos do Papilomavírus Humano (HPV). A família do HPV apresenta cerca de 200 tipos diferentes de vírus, sendo o HPV 16 e 18 os mais comuns e responsáveis por 70% a 80% do câncer cervical. O HPV é um vírus de DNA, pequeno e circular, envolto em um capsídeo proteico icosaédrico. Apresenta três importantes regiões genômicas que são denominadas: Região reguladora up-stream (URR); Early (E) e Late (L). E2 é um repressor transcricional e tem sua função perdida após a integração do genoma viral, resultando no aumento de expressão dos genes E6 e E7. Esse evento resulta no acúmulo de danos ao DNA, degradando p53 e pRb e, por consequência, interrompendo controles celulares como apoptose e proliferação descontrolada. Dentre as alterações epigenéticas, destaca-se o processo de desacetilação das histonas como alternativa no tratamento de algumas doenças. As HDACs (Histona Deacetilase) removem grupamentos acetil de lisinas presentes na cromatina, causando alteração em seu estado conformacional, retornando ao estado condensado. A disfunção da enzima HDAC de classe I, tipo 8 está sendo proposta como alternativa para o câncer cervical associado ao HPV. A terapia combinada é uma modalidade de tratamento que agrega dois ou mais agentes terapêuticos, que pode ter ação sinérgica aditiva ou antagônica, possibilitando um aumento da eficácia em comparação com a abordagem de monoterapia. Neste trabalho avaliamos o potencial de dois compostos: Quercetina e o composto estilbeno (derivado sintético, JSK6) de atuar como possíveis antivirais com ação de inibidor de HDAC. Os compostos foram avaliados em monoterapia e terapia combinada em linhagem de HaCaT, Caski, SiHa e C33-A, através de ensaios de MTT e análise de resultados utilizando Graph Pad Prism 5.1 e SinergyFinder. A Quercetina apresentou melhor ação nas células infectadas com HPV, apresentando um IC50 de 104,83μM em SiHa e 81,26μM em CasKi. O composto JSK6 apresentou uma curva dose resposta em todas linhagens. No tratamento combinado, os compostos apresentaram ação, majoritariamente, antagônica nas células de queratinócitos (HaCat) e de com a presença de HPV (SiHa).

Cervical cancer is the fourth most common type of cancer in women. This cancer is mostly associated with persistent infection by oncogenic types of Human Papillomavirus (HPV). The HPV family has about 200 different types of viruses, with HPV 16 and 18 being the most common and responsible for 70% to 80% of cervical cancer. HPV is a small, circular DNA virus enclosed in an icosahedral protein capsid. It presents three important genomic regions that are called: Upstream regulatory region (URR); Early (E) and Late (L). E2 is a transcriptional repressor and its function is lost after integration into the viral genome, resulting in increased expression of the E6 and E7 genes. This event results in the accumulation of DNA damage, degrading p53 and pRb and, consequently, disrupting cellular controls such as apoptosis and uncontrolled proliferation. Among the epigenetic alterations, the histone deacetylation process stands out as an alternative in the treatment of some diseases. HDACs (Histone Deacetylase) remove acetyl groups of lysines present in chromatin, causing a change in its conformational state, returning to the condensed state. HDAC enzyme class I, type 8 dysfunction is being proposed as an alternative for HPV-associated cervical cancer. Combined therapy is a treatment modality that combines two or more therapeutic agents, which can have an additive or antagonistic synergistic action, allowing an increase in efficacy compared to the monotherapy approach. In this study, we evaluated the potential of two compounds: Quercetin and the compound stilbene (synthetic derivative, JSK6) to act as possible antivirals with HDAC inhibitor action. The compounds were evaluated in monotherapy and combination therapy in HaCaT, Caski, SiHa and C33-A strains, through MTT assays and analysis of results using Graph Pad Prism 5.1 and SinergyFinder. Quercetin showed better action in cells infected with HPV, with an IC50 of 104.83μM in SiHa and 81.26μM in CasKi. The JSK6 compound showed a dose-response curve in all strains. In the combined treatment, the compounds showed mostly antagonistic action on keratinocyte cells (HaCat) and cells with the presence of HPV (SiHa).