Estudo dos efeitos de nanoemulsões de curcumina e piperina sobre a produção de lipopartículas do vírus da hepatite C e controle das vias de apoptose reguladas pela fosfoproteína NS5A em sistema In Vitro

Abstract

A hepatite C é uma doença inflamatória crônica, causada pelo vírus HCV, o qual acomete milhares de pessoas em todo o mundo. O processo inflamatório crônico causado pela hepatite C pode acarretar em quadros clínicos mais graves, como cirrose e carcinoma hepatocelular. Os tratamentos disponíveis no mercado são eficientes quanto a negativação da carga viral, entretanto, além de causarem efeitos colaterais também são ineficazes quanto ao controle do processo inflamatório, caracterizando-se como o fator mais problemático da doença atualmente. Neste contexto, os compostos naturais bioativos (CNBs), curcumina e piperina, podem apresentar-se como uma possível alternativa, atuando como adjuvantes aos tratamentos já estabelecidos, potencializando os efeitos terapêuticos e contribuindo na diminuição dos efeitos adversos, além de controlar o processo inflamatório. O objetivo deste estudo foi analisar os mecanismos e vias moleculares importantes para a replicação e montagem viral, via SMAD 6, SMAD 7 e VAP-A, além das vias relacionadas à inibição da apoptose, HIF-1 α e p62, todas relacionadas à fosfoproteína NS5A, e dessa forma, comparar os resultados de células não infectadas (Huh 7.5) com as células infectadas por HCV (SGR-JFH1). Afim de melhorar a biodisponibilidade dos compostos naturais, foi utilizado um sistema de entrega de nanoemulsão. A fosfoproteína NS5A não respondeu aos tratamentos com CNBs, enquanto as proteínas HIF-1α e p62 não foram detectadas por western blotting, impossibilitando a determinação dos resultados em células Huh 7.5 e SGR-JFH1. Através das análises de PCR em tempo real foi observado que ambos os CNBs, com ou sem nanoemulsão, diminuíram significativamente a carga viral do HCV, não apresentando diferenças significativas entre si. Além disso, também foi testado o efeito do sistema de nanoemulsão sem os compostos naturais, que gerou um aumento da carga viral em células SGR-JFH1. Os resultados demonstraram que ambos os tratamentos surtiram o mesmo efeito na análise de PCR em tempo real, em células Huh 7.5 e SGR-JFH1, sobre as expressões das SMAD 6, exceto os CNBs sem nanoemulsão, que elevou a expressão da smad em questão na SGR-JFH1. Apenas os compostos não emulsionados aumentaram a expressão da SMAD 7 e VAP -A em SGR-JFH1. A nanoemulsão sem CNBs elevou significativamente a expressão de SMAD 6, porém o mesmo não ocorreu com a SMAD 7 e VAP-A. A nanoemulsão também não apresentou efeito sobre a apoptose, enquanto que os CNBs com ou sem o sistema de nanoemulsão demonstraram entre 30 e 40% de apoptose tanto em células Huh 7.5 quanto em SGR-JFH1.

Hepatitis C is a chronic inflammatory disease caused by the HCV virus, which affects thousands of people worldwide. The chronic inflammatory process caused by hepatitis C can lead to more serious clinical conditions, such as cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The treatments available on the market are efficient in terms of negative viral load, however, in addition to causing side effects, they are also ineffective in controlling the inflammatory process, characterizing it as the most problematic factor of the disease today. In this context, natural bioactive compounds (NBCs), curcumin and piperine, can be presented as a possible alternative, acting as adjuvants to already established treatments, enhancing therapeutic effects and contributing to the reduction of adverse effects, besides controlling the inflammatory process. The objective of this study was to analyze the mechanisms and important molecular pathways for viral replication and assembly, via SMAD 6, SMAD 7 and VAP-A, in addition to the pathways related to the inhibition of apoptosis, HIF-1 α and p62, all related to phosphoprotein NS5A, and thus compare the results of uninfected cells (Huh 7.5) with HCV-infected cells (SGR-JFH1). In order to improve the bioavailability of the natural compounds, a nanoemulsion delivery system was used it. The NS5A phosphoprotein did not respond to treatments with NBCs, while the HIF-1α and p62 proteins were not detected with western blotting, making it impossible to determine the results in Huh 7.5 and SGR-JFH1 cells. Through real-time PCR analysis, it was observed that both NBCs, with or without nanoemulsion, significantly reduced the HCV viral load, showing no significant differences between them. Moreover, the effect of the nanoemulsion system without the natural compounds was also tested, which generated an increase in viral load in SGR-JFH1 cells. The results demonstrated that both treatments had effect in the real-time PCR analysis, in Huh 7.5 and SGR-JFH1cells, about expressions of SMAD 6, except NBCs without nanoemulsion, which increased the expression of the smad in question in SGR-JFH1 cells. Only non-emulsified compounds increased SMAD 7 and VAP-A expression. in SGR-JFH1. The nanoemulsion system without the natural compounds was also tested, significantly increased the expression of SMAD 6, but the same did not occur with SMAD 7 and VAP-A. The nanoemulsion also had no effect on apoptosis, whereas NBCs with or without the nanoemulsion system demonstrated levels of apoptosis between 30 and 40% in both Huh 7.5 and SGR-JFH1 cells.