Desenvolvimento e validação de método por cromatografia líquida de alta eficiência para determinação de metabólitos secundários em extrato de folhas de Varronia curassavica Jacq. (erva-baleeira)

Abstract

Varronia curassavica Jacq., conhecida popularmente como erva-baleeira, é uma espécie de planta originária do Brasil, encontrada principalmente na Floresta Tropical Atlântica. Além de amplamente utilizada na medicina tradicional, está presente na Relação Nacional de Plantas Medicinais de Interesse ao Sistema Único de Saúde, no Formulário Nacional de Fitoterápicos da Farmacopeia Brasileira e seu óleo essencial é utilizado no medicamento fitoterápico Acheflan®, desenvolvido pelo laboratório Aché® em parceria com a Universidade Federal de Santa Catarina. A erva-baleeira é conhecida principalmente por sua ação anti-inflamatória e dados recentes da literatura mostraram que esta ação deve estar relacionada à presença de fenilpropanoides, flavonoides e sesquiterpenos em suas folhas. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e a validação de um método por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção no ultravioleta (CLAE-UV) para quantificar metabólitos secundários majoritários em extrato hidroetanólico de folhas da erva-baleeira. O método cromatográfico em modo reverso (C18) foi desenvolvido com base na otimização da fase móvel (metanol e ácido acético 2%), modificando a força de eluição e os tempos de gradiente, resultando em um método com boa resolução para detecção de fenilpropanoides, flavonoides e triterpenos. Os teores encontrados dos padrões ácido rosmarínico e cordialina A foram respectivamente 5,0 e 1,1%. Foram realizados experimentos para estabelecer os parâmetros necessários de validação do método de acordo com a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), sendo eles linearidade, seletividade, sensibilidade, precisão e exatidão. O método desenvolvido apresenta seletividade e sensibilidade para ácido rosmarínico e cordialina A e linearidade, precisão e exatidão dentro dos valores estabelecidos pela ANVISA. Sendo assim o mesmo é apto para detecção e quantificação de ácido rosmarínico e cordialina A e também pode servir de base para análises metabolômicas do extrato hidroetanólico de V. curassavica.

Varronia curassavica Jacq., popularly known as erva-baleeira, is a plant species from Brazil, found mainly in the Atlantic Rainforest. It is widely used in traditional medicine and it is included in the National List of Medicinal Plants of Interest to the Unified Health System and in the National Form of Herbal Medicines of the Brazilian Pharmacopoeia. Its essential oil is used in the herbal medicine Acheflan®, developed by Aché Laboratories in partnership with the Federal University of Santa Catarina. Baleeira is known mainly for its anti-inflammatory action and according to recent literature data this action must be related to phenylpropanoids, flavonoids and sesquiterpenes of its leaves. The objective of this work was the development and validation of a method by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV) to quantify major secondary metabolites in hydroethanolic extract of erva-baleeira leaves. The reverse phase chromatographic method (C18) was developed based on the optimization of the mobile phase (methanol and acetic acid 2%), varying the elution strength and gradient time, resulting in a method with acceptable resolution for detecting phenylpropanoids, flavonoids and triterpenes. The contents of rosmarinic acid and cordialin A were respectively 5,0 and 1,1%. The experiments were carried out to establish the method validation parameters according to the Brazilian National Health Surveillance Agency (ANVISA), including linearity, selectivity, sensitivity, precision and accuracy.The developed method presents selectivity and sensitivity for rosmarinic acid and cordialin A and linearity, precision and accuracy within the values established by ANVISA. Therefore, it is suitable for detection and quantification of rosmarinic acid and cordialin A and also for metabolomic analyses of V. curassavica.