Ocorrência de clostridioides difficile em bezerros

Abstract

Clostridioides difficile é o agente causador da diarreia e da colite pseudomembranosa,especialmente em pacientes humanos internados e sob antibioticote rapia. O conjunto dessas infecções causadas por este patógeno denomina-se infecção por C. difficile (CDI). Em bezerros a diarreia neonatal é causada por inúmeros patógenos virais, bacterianos e parasitários. Todavia, à CDI em bezerros ainda é incerta e precisa ser melhor compreendida. Desta forma, este estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de C. difficile em bezerros neonatos em propriedade rurais de subsistência com baixa tecnificação de Botucatu/SP. Os procedimentos realizados foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA (Protocolo 0215/2022- CEUA). Foram colhidas 25 amostras de fezes diretamente da ampola retal de bezerros de cinco propriedades (A, B, C, D e E). Os bezerros possuíam idade média de 18,9±9 dias e criados em sistema extensivo de produção de leite, permanecendo juntos às vacas durante a maior parte do dia,sendo apartados apenas 10h antes da ordenha. As amostras de fezes foram inoculadas em meio líquido de frutose não seletivo enriquecido com 0,1% de tauracolato de sódio por 8 dias a 37ºC, com posterior choque com etanol 100%. Em seguida foram plaqueadas em meio ágar C. difficile moxalactam norfloxacin (CDMN) enriquecido com 5% de sangue desfibrinado de equino e incubadas a 37º C em anaerobiose. As colônias sugestivas de C. difficile foram confirmadas pelo teste de L-Prolina e semeadas em ágar Columbia. Realizou-se a obtenção do DNA e a PCR multiplex para determinação do perfil toxigênico (tcdA,tcdB, cdtA e cdtB); e realização da PCR-ribotipagem para as cepas toxigênicas, além da avaliação do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e motilidade. Dos bezerros estudados, oito apresentavam diarreia no momento da colheita. Foi realizado o isolamento do C. difficile em 38,5% (10/25 dos bezerros, obtendo-se os seguintes resultados de ocorrência 1/5 (20%), 1/2 (50%), 2/3 (66%), 1/5 (20%) e 5/10 (50%) nas propriedades A,B,C, D e E, respectiva mente. Dentre os bezerros com diarreia, quatro foram positivos no cultivo em anaerobiose (4/8 -50%),sendo todas as cepas não produtoras de toxinas. Entre os 10 isolados, nove amostras foram não toxigênicas e uma foi toxigênica (A B CDT ), pertencendo ao ribotipo 106 (RT106), isolada de um bezerro com 30 dias de idade com histórico prévio de Tristeza Parasitária Bovina na propriedade, sem a realização de antibioticoterapai A. Esta cepa apresentou resistência à vancomicina e foi sensível a morfloxacina e com a presença de colônias heteroresistentes (vancomicina,metronidazol e rifampici na) e bastante móvel,quando comparada ao controle positivo (cepa R20291).O RT 106, é um dos mais comuns detectados em seres humanos e animais, foi descrito recentemente causando surtos hospitalares em unidades de terapia intensiva humana e no Brasil já foi descrito em cães,porém esta é a primei ra descrição em bezerros.A presença de colônias heteroresistentes com perfil multirresistente a antimicrobianos,principalmente ao metronidazol,pode estar associada a quadros mais graves da doença.A presença do C. difficile em bezerros de leite, pode favorecer a transmissão destas cepas a seres humanos e a animais mais jovens ou imunocomprometidos. O C. difficile pode ser encontrado em bezerros neonatos, e cepas toxigênicas circulam entre esta faixa etária.