Diagnóstico molecular para Coxiella burnetii em leite bovino coletado de tanques de refrigeração de pequenas propriedades e análise espacial

Abstract

Coxiella burnetii (C. burnetii) é uma bactéria gram-negativa causadora de uma zoonose cosmopolita denominada febre Q. Infecta diferentes animais, sendo os grandes ruminantes (bovinos) o maior reservatório. É conhecida por causar distúrbios gestacionais, tais como abortamentos, natimortos e partos prematuros, além de ocasionar infertilidade, gerando grande prejuízo econômico. A infecção em humanos ocorre pela inalação de aerossóis provindos dos excrementos, leite ou contato com produtos do parto destes animais. O objetivo deste estudo foi investigar C. burnetii em 102 amostras de leite bovino, a partir do leite de tanques de expansão de pequenas propriedades de agricultura familiar, situadas em oito municípios, abrangendo a região Centro-Oeste Paulista. Para isso, utilizou-se as técnicas moleculares de Reação em Cadeia da Polimerase convencional (PCR), Nested-PCR e PCR em tempo real (qPCR) e, em seguida, realizou-se o sequenciamento genético. Posteriormente, foi realizada a análise geográfica de distribuição de casos positivos diagnosticados nas regiões estudadas. Detectou-se C. burnetii em dezesseis amostras (15,68%) por Nested-PCR, vinte e duas (21,57%) pela qPCR/Sybr e trinta e duas (31,37%) pela qPCR/Sonda. A concordância entre os métodos demonstrou-se mediana. Houve detecção em sete dos oito municípios testados (87,50%). O genótipo identificado foi ST61. A identificação de C. burnetii indica possíveis riscos de infecção e impactos negativos na pecuária, de maneira silenciosa, visto que não há testagem sistemática na rotina de diagnóstico da qualidade do leite, levando à sub-notificação.

Coxiella burnetii (C. burnetii) is a gram-negative bacterium that causes a cosmopolitan zoonosis called Q fever. It infects a range of animals, but large ruminants (cattle) being the largest reservoir. It is known for causing gestational disorders in animals such as miscarriage, stillbirths and premature births, and infertility, generating a large negative economic impact. Infection in humans occurs through inhalation of aerosols containing the bacteria, coming from the excrement, milk or birth products of these animals. Therefore, the objective of this work was to research C. burnetii in 102 samples of milk from lactating cows, from milk from bulk tanks of small family farming properties. Different municipalities in the Central-West region of São Paulo were tested. The molecular techniques of conventional Polymerase Chain Reaction (PCR), Nested PCR and real-time PCR (qPCR- Sybr and Probe) were used and then genetic sequencing was carried out. Subsequently, a geographic analysis of the distribution of positive cases diagnosed in the different regions studied was carried out. C. burnetii was detected in sixteen samples (15.68%) by Nested-PCR, twenty-two (21.57%) by qPCR/Sybr and thirty-two (31.37%) by qPCR/Probe, the agreement between the methods proved to be reasonable. There was detection in seven of the eight cities tested (87.50%). The genotype idenfied was ST61. There is evidence of possible outbreaks and negative impacts on livestock that the presence of C. burnetii can cause silently, as notification and testing of the bacteria is not carried out, resulting in underreporting.