Diversidade genética de Trichomonas gallinae em aves selvagens no Brasil

Abstract

A tricomonose aviária causada pelo protozoário Trichomonas gallinae é uma doença que afeta, sobretudo, o trato digestório superior das aves. Os principais hospedeiros naturais deste agente são as aves da ordem Columbiformes, Falconiformes e Strigiformes. As lesões orais, obstruindo os tratos digestórios e respiratórios superiores dificultam a alimentação e respiração e, frequentemente, causam a morte por fome, desidratação e asfixia/apneia. O estudo mais detalhado da tricomonose em aves se justifica visto que a patogenicidade do agente etiológico é variada. O objetivo do estudo foi investigar a ocorrência e diversidade genética de tricomonadídeos em diferentes espécies de aves selvagens no Brasil, a fim de investigar a possível associação entre genótipo do parasito, espécie de ave e presença ou ausência de lesões características da tricomonose aviária. Para tal, foram analisadas amostras biológicas de aves de vida-livre e de cativeiro pertencentes a grupos taxonômicos das ordens Accipritiformes, Anseriformes, Columbiformes, Falconiformes, Gruiformes, Passeriformes, Pisciformes, Psittaciformes, Strigiformes. Foram analisadas amostras de suabes orofaríngeos de aves vivas provenientes de cativeiro (zoológicos, clínicas veterinárias e centros de triagem) e de vida livre, assim como de aves mortas encaminhadas para necropsia. Das aves vivas de cativeiro foram colhidas amostras de suabe da mucosa de orofaringe e de inglúvio destinados para cultura em meio Diamond e para ensaios moleculares para tricomonadídeos a partir de prévia extração de DNA. Das aves vivas capturadas no Pantanal foram colhidas suabes de mucosa orofaringe utilizadas apenas para técnica molecular (PCR). Os ensaios moleculares tiveram como alvos fragmentos da região intergênica ITS1-5.8S-ITS-2, gene Fe-hidrogenase e 18S rRNA. As sequências obtidas foram submetidas a análises filogenéticas e de diversidade genotípica. Em conclusão, ITS-1/5.8S/ITS-2 parece ser um marcador importante para triagem molecular para Trichomonas gallinae e o Fe hidrogenase se mostrou melhor para diferenciar os genótipos. O ensaio de PCR foi um dos métodos utilizados para identificar as amostras positivas em diferentes ordens de aves, e demonstrou ser a melhor ferramenta, para o diagnóstico e investigação epidemiológica da infecção por T. gallinae. Conclui-se que a ordem Columbiformes é afetada pelo agente e que, de acordo com a literatura existente, é o principal reservatório do parasito em várias cidades do estado de São Paulo.

Avian trichomonosis caused by the protozoan Trichomonas gallinae is a disease that mainly affects the upper digestive tract of birds. The main natural hosts of this agent are birds of the orders Columbiformes, Falconiformes and Strigiformes. Oral lesions, obstructing the digestive and upper respiratory tracts, make feeding and breathing difficult and often cause death by starvation, dehydration and asphyxia/apnea. A more detailed study of trichomonosis in birds is justified since the pathogenicity of the etiological agent is varied. The objective of the study was to investigate the occurrence and genetic diversity of trichomonads in different species of wild birds in Brazil, in order to investigate the possible association between the genotype of the parasite, bird species and the presence or absence of lesions characteristic of avian trichomonosis. Biological samples from free-ranging and captive birds belonging to taxonomic groups of the orders Accipritiformes, Anseriformes, Columbiformes, Falconiformes, Gruiformes, Passeriformes, Pisciformes, Psittaciformes, and Strigiformes were analyzed. Oropharyngeal swabs were collected from live birds from captivity (zoos, veterinary clinics, and screening centers) and from free-ranging birds, as well as from dead birds sent for necropsy. Swab samples from the oropharyngeal mucosa and the ingulvium were collected from live captive birds for culture in Diamond medium and for molecular assays for trichomonads based on prior DNA extraction. Oropharyngeal mucosa swabs were collected from live birds captured in the Pantanal and used only for molecular techniques (PCR). The molecular assays targeted fragments of the ITS1-5.8S-ITS-2 intergenic region, Fe-hydrogenase gene and 18S rRNA. The sequences obtained were subjected to phylogenetic and genotypic diversity analyses. In conclusion, ITS-1/5.8S/ITS-2 appears to be an important marker for molecular screening for Trichomonas gallinae and Fe hydrogenase proved to be the best marker for differentiating genotypes. The PCR assay was one of the methods used to identify positive samples in different orders of birds, and proved to be the best tool for the diagnosis and epidemiological investigation of T. gallinae infection. It is concluded that the order Columbiformes is affected by the agent and that, according to the existing literature, it is the main reservoir of the parasite in several cities of the state of São Paulo.