Participação do T3 no controle pós-transcricional da expressão de HIF1A e TGFA em linhagem celular de adenocarcinoma de mama e avaliação do envolvimento de potenciais miRNAs

Abstract

O câncer de mama (CM) é o primeiro em taxa de mortalidade em mulheres no mundo e o segundo mais frequente entre as mulheres no Brasil. Os fatores de risco estão relacionados com a idade, fatores ambientais, comportamentais, genéticos/hereditários, história reprodutiva e hormonal, bem como os hormônios tireoidianos (HT) que têm sido propostos por influenciar o desenvolvimento de CM. A superexpressão do fator induzido por hipóxia 1 subunidade alfa (HIF1A) e o fator transformador de crescimento alfa (TGFA) está positivamente relacionada com a agressividade do tumor e com a progressão maligna em neoplasias humanas, porém não foi avaliada a participação do hormônio triiodotironina (T3) na expressão desses genes em vias extranucleares MAPK/ERK e integrina αvβ3. No CM, a desregulação na expressão de microRNAs (miRNA) têm sido detectada em casos metastáticos e de pior prognóstico, sugerindo funções importantes na oncogênese mamária e na progressão do câncer. Nosso objetivo foi verificar o envolvimento do T3 no controle pós-transcricional da expressão de mRNA HIF1A e TGFA e avaliar se os miRNAs envolvidos no CM, let-7a-5p, miR-200a-3p e miR-335-5p, são modulados por esse hormônio em células de adenocarcinoma de mama MCF7. A linhagem celular de adenocarcinoma de mama MCF7 foi submetida ao tratamento com T3 na dose suprafisiológica (10-8M) por 1 hora, na presença ou ausência de drogas específicas para o bloqueio de vias de sinalização intracelulares para abordagem de ações extranucleares dos HT, como PD98059 (inibidor da MAPK/ERK), Peptideo RGD (que se liga a integrina αvβ3) e α-amanitina (inibidor especifico da RNA polimerase II), com posterior análise de expressão gênica de HIF1A e TGFA, assim como, os miRNAs let-7a-5p, miR-200a-3p e miR-335-5p por meio da técnica de RT-qPCR. Os resultados demonstram que a ativação das vias MAPK/ERK e integrina αvβ3 pelo T3 são necessárias para modular a expressão de mRNA de HIF1A e TGFA e a inibição da transcrição gênica demonstra que o T3 não mantém a estabilidade pós-transcricional dos mRNAs estudados em células MCF7. O T3 exerceu efeito supressor na expressão do miRNA let-7a-5p, podendo estar correlacionado com pior progressão tumoral e não interfere na expressão de miR-200a-3p e miR-335-5p nessa linhagem celular.