Cryopreservation of semen from functional sex-reversed genotypic females of the rainbow trout, Oncorhynchus mykiss

Abstract

A criopreservação do sêmen de fêmeas masculinizadas de truta arco-íris tem como objetivo a racionalização do processo de produção de estoques 100% femininos. Para tal, foi coletado sêmen de machos normais (M) e de dois tipos de fêmeas genotípicas (R e G), masculinizadas pela administração oral de 17alfa-metiltestosterona. R foi obtido pela fertilização de ovócitos normais com sêmen de fêmeas masculinizadas enquanto G foi através de reprodução ginogenética. O sêmen foi diluído em uma solução crioprotetora (glicose 5,4 g, gema de ovo de galinha 10 ml, dimetil sulfóxido 10 ml, água destilada 80 ml) na razão de 1:3 (sêmen/diluidor), envasado em palhetas de 0,5 ml e congelado em um container tipo seco Cryopac CP-65, à temperatura de -180ºC. A descongelação foi feita em água a 70ºC por 3 segundos. As taxas de fertilização obtidas, não revelaram diferença estatística significativa (P<0.05) entre os três grupos de sêmen descongelados (M = 73,1&plusmn;11,5%; R = 67,2&plusmn;23,6%; G = 64&plusmn;5,8%), indicando que a metodologia de congelação utilizada foi eficaz, tanto na criopreservação do sêmen das trutas normais como para o das masculinizadas.

Cryopreservation of semen from sex-reversed females of rainbow trout aims at rationalizing the production of stocks composed by 100% females. Semen from normal males (M) and two types of genotypic females (R and G), sex-reversed by the oral administration of 17alpha-methyltestosterone, were used. R was obtained by the fertilization of normal eggs with semen of sex-reversed females while G via gynogenetic reproduction. Semen was diluted in an extender solution (glucose 5,4 g, egg yolk 10 ml, dimetil sulfoxide 10 ml, water 80 ml) at 1:3 ratio (semen/extender), stored in straws of 0.5 ml and freezed in a dry container Cryopac CP-65, at -180ºC. Thawing was performed with water at 70ºC for 3 seconds. There were no significant fertilization rate differences (P>0.05) among thawed semen groups (M = 73.1&plusmn;11.5%; R = 67.2&plusmn;23.6%; G = 64&plusmn;5.8%), confirming that the freezing methodology used was efficient to cryopreserve semen of all three trout groups.