Análise imuno-histoquímica de citocinas envolvidas na osteoclastogênese em ratos com periodontite tratados com diacereína
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Data
2024-10-25
Autores
Orientador
Cerri, Paulo Sérgio 
Coorientador
Pós-graduação
Curso de graduação
Araraquara - FOAR - Odontologia
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
A periodontite (P) é uma doença provocada pela disbiose do biofilme dental que induz uma resposta imunoinflamatória do hospedeiro causando a liberação de diversas citocinas inflamatórias, tais como o TNF-α, IL-β e IL-6. Essas citocinas induzem a formação de osteoclastos e, consequentemente, a reabsorção óssea. Dessa maneira, o objetivo do estudo foi investigar se a diacereína (D), um inibidor de IL-β e TNF-α, interfere na osteoclastogênese em ratos com P. Foram utilizados 54 ratos adultos, distribuídos nos grupos GC (grupo controle), GPS (grupo com P+solução salina) e GPD (grupo com P+D). A P foi induzida com inserção de um fio de algodão no colo cervical do 1º molar superior. Após 7 dias, a ligadura foi removida, os animais do GPD receberam, diariamente, 100mg/kg de massa corpórea de D por gavagem. Após 7, 15 e 30 dias, 6 animais de cada grupo/período foram sacrificados e os fragmentos de maxila contendo os molares foram removidos e processados para inclusão em parafina. De cada espécime, cortes foram corados com tricrômico de Masson para análise morfológica e mensuração da área óssea do processo alveolar inter-radicular (APA), subjacente à região de furca do molar. Em cada espécime, 3 cortes não seriados foram submetidos à fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) para contagem de osteoclastos. Outros cortes foram submetidos as reações imuno-histoquímicas para detecção de IL-6, RANKL e OPG e o número de células imunopositivas foi computado na mucosa gengival. A IL-1β e TNF-α foram detectadas por imunofluorescênica e a área positiva na mucosa gengival foi mensurada. Os dados foram submetidos ao two-way ANOVA e pós-teste de Tukey (p<0,05). Os cortes corados em tricrômico de Masson revelaram perda óssea do processo alveolar interdentário, infiltrado inflamatório na mucosa gengival e migração do epitélio gengival nos espécimens do GPD e GPS. Em todos os períodos, a APA no GPS foi menor significantemente em comparação ao GC, enquanto aos 30 dias, não houve diferença significante entre GPD e GC. As 7 e 15 dias, o número de osteoclastos foi significantemente maior no GPS em comparação ao GPD, enquanto nenhuma diferença significante foi detectada aos 30 dias. Em todos os períodos, diferenças significantes no número de osteoclastos não foram detectadas entre GPD e GC. Em contraposição, o número de osteoclastos no GPS foi significantemente maior em comparação aos espécimes do GC, em todos os períodos. A imunoexpressão de TNF-α, IL-1β e IL-6 foi menor significantemente no GPD em comparação ao GPS, em todos os períodos. Aos 7 e 30 dias, o número de células imunopositivas ao RANKL foi significantemente reduzido no GPD em comparação ao GPS. Em todos os períodos, a imunoexpressão da OPG foi maior no GPD em comparação ao GPS enquanto a razão RANKL/OPG foi significantemente maior no GPS em relação ao GC e GPD. Conclui-se que a D inibiu a secreção de IL-1β, TNF-α e IL-6 na periodontite, resultando em uma redução expressiva na proporção RANKL/OPG, inibindo a formação de osteoclastos o que deve explicar, pelo menos em parte, a diminuição do número de osteoclastos nos animais do GPD.
Resumo (inglês)
Periodontitis (P) is a disease caused by dysbiosis of the dental biofilm, which induces a host immunoinflammatory response, leading to release of various inflammatory cytokines, including TNF-α, IL-1β, and IL-6. These cytokines induce osteoclast formation and consequently bone resorption. Therefore, the aim of this study was to evaluate whether diacerein (D), an IL-1β and TNF-α inhibitor, interferes with osteoclastogenesis in rats with induced P. 54 adult rats were distributed into three groups: CG (control group), PSG (P+saline group), and PDG (P+D group). P was induced by inserting a cotton ligature around the cervical neck of the first upper molar. After 7 days, the ligature was removed, and the PDG animals received a daily dose of 100mg/kg body weight of D by gavage. At 7, 15, and 30 days, 6 animals from each group/period were sacrificed, and the fragments of maxilla containing the molars were removed and processed for paraffin-embedding. Sections were stained with Masson's trichrome for morphological analysis and alveolar process bone area (APA) measurement. In each specimen, 3 non-serial sections were subjected to tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemical reaction and the number of osteoclasts was computed. Other sections were subjected to immunohistochemical/immunofluorescence reactions for TNF-α, IL-1β, IL-6, RANKL and OPG detection, and the immunofluorescent area or number of immunolabelled cells was estimated in the gingival mucosa. Data were analyzed using two-way ANOVA and Tukey's post-test (p<0.05). Masson's trichrome-stained sections revealed interproximal alveolar bone loss, inflammatory infiltrate in the gingival mucosa, and gingival epithelium migration in the PDG and PSG specimens. In all the periods, APA in the PSG was significantly lower than in CG specimens, whereas no significant difference was observed between PDG and CG at 30 days. At 7 and 15 days, the number of osteoclasts was significantly greater in the PSG than in PDG specimens, but no significant difference was detected at 30 days. Significant differences in number of osteoclasts were not detected between PDG and CG in all periods. In contrast, the number of osteoclasts was greater significantly in PSG specimes than in CG in all time points. TNF-α, IL-1β and IL-6 immunoexpression was significantly lower in PDG than in PSG specimes in all time points. At 7 and 30 days, the number of RANKL-immunolabelled cells was significantly reduced in PDG in comparison with PSG specimens. Conversely, OPG immunoexpression was greater in PDG than in PSG in all periods. Additionally, the RANKL/OPG ratio was significantly greater in PSG than in CG and PDG in all periods. Thus, our results showed that significant reduction in IL-1β, TNF-α and IL-6 caused by diacerein promoted significant reduction in the RANKL/OPG ratio, inhibiting osteoclast formation, which may at least partially explain the decreased number of osteoclasts in the alveolar bone from PDG specimes.
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português
Como citar
Rodrigues LA. Análise imuno-histoquímica de citocinas envolvidas na osteoclastogênese em ratos com periodontite tratados com diacereína [Trabalho de Conclusão de Curso – Graduação em Odontologia]. Araraquara: Faculdade de Odontologia da UNESP; 2024.