Avaliação da expressão gênica e proteica do Receptor Ativado por Proliferador de Peroxissoma Gama em modelo murino de Diabetes Mellitus e Periodontite
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Data
2024-07-31
Autores
Orientador
Caminaga , Raquel Mantuaneli Scarel 
Coorientador
Pós-graduação
Odontologia - FOAR
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
É cada vez mais frequente encontrar pacientes afetados pela combinação de Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) e Periodontite (P). Ambas as patologias elicitam a resposta imune inflamatória no indivíduo, na qual atua o Receptor Ativado por Proliferador de Peroxissoma Gama (Ppar-γ) com ação anti-inflamatória, sendo também importante na regulação do metabolismo glicêmico e lipídico. No entanto, são poucos os estudos que investigam a participação do Ppar-γ na modulação do DM2 e P. Estudos com modelos animais tem sido o desenho experimental de escolha quando se deseja conhecer de modo mais controlado a possível influência de uma determinada molécula em um contexto patológico. O objetivo geral deste estudo foi avaliar a expressão gênica e proteica do Ppar-γ em camundongos submetidos à indução do Diabetes Mellitus e Periodontite. Metodologia: 192 camundongos C57BL/6J machos com 8 semanas de idade e 22g de peso foram distribuídos nos grupos: DM, DM_P, P, e C. DM foi induzido pela combinação de dieta hiperlipídica (56 dias antes da indução da Periodontite) e injeção de estreptozotocina, 28 dias antes da indução da Periodontite, que ocorreu pela combinação de ligadura e infecção por Porphyromonas gingivalis (P.g). O peso corporal e a glicemia pós-prandial de todos os animais foram avaliados semanalmente. Doze animais em cada grupo foram eutanasiados nos períodos experimentais Zero, 7, 14 e 21 dias após a indução de P. Os parâmetros bioquímicos foram dosados no plasma. A perda de volume ósseo periodontal nos animais foi analisada por micro-CT. Em todos os grupos e períodos foram avaliados os níveis de Ppar-γ, além de Tnf-α, por meio de: (i) quantificação dos níveis transcricionais sistêmicos (mRNA nos leucócitos), traducionais sistêmicos (níveis proteicos nos leucócitos); além de transcricionais do periodonto (mRNA gengival) e traducionais (imuno-histoquímica em gengiva). Foi realizada morfometria do tecido gengival e avaliação histológica de fígado e rim. Houve sucesso do modelo experimental de DM comprovado por altos níveis de glicemia pós-prandial e colesterol total nos grupos diabéticos. O sucesso do modelo experimental de periodontite foi comprovado por micro-CT dada a maior perda óssea alveolar nos grupos com P. A expressão gênica de Pparg nos leucócitos foi significativamente maior no grupo “C” no tempo Zero e 7 dias. No acompanhamento longitudinal, o grupo “P” é o que apresentou os menores níveis sistêmicos de mRNA do Pparg; e o maior para Tnfa. A expressão do gene Pparg na gengiva foi significativamente maior no grupo “P” em 14 dias, e do gene Tnfa no mesmo período houve tendência de maior expressão no grupo “DM_P”. Nesse mesmo grupo em 7 dias houve significativa maior expressão proteica sistêmica de Tnf-α. Houve uma tendência de mais células imunopositivas para Pparγ no grupo “C” em todos os tempos, e para Tnf-α nos grupos com pelo menos uma das doenças em 7 e 21 dias. Houve maior porcentagem de células inflamatórias e de vasos sanguíneos nas gengivas dos grupos “DM_P” e “P” em 21 dias. Foram observadas em 21 dias gotículas lipídicas ou vacúolos no fígado e rim de animais com “DM” e “DM_P” em comparação ao grupo “C”. Conclui-se que os níveis de mRNA de Pparg sistêmicos, e de Ppar-γ proteicos na gengiva foram maiores no grupo “C”. Em contraste, Tnfa teve a expressão gênica sistêmica principalmente elicitada pelo grupo “P”, e proteica no plasma pelo grupo “DM_P” em 7 dias, concordando com maior porcentagem de células inflamatórias e vasos sanguíneos no tecido gengival em 21 dias.
Resumo (inglês)
It is increasingly common to find patients affected by the combination of Type 2 Diabetes Mellitus (DM2) and Periodontitis (P). Both pathologies elicit an inflammatory immune response in the individual, in which the Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma (Ppar-γ) acts with anti-inflammatory action, and is important in the regulation of glycemic and lipid metabolism. However, there are few studies that investigate the participation of Ppar-γ in the modulation of DM2 and P. Studies with animal models have been the experimental design of choice when one wants to know in a more controlled way the possible influence of a given molecule on a pathological context. The general objective of this study was to evaluate the gene and protein expression of Ppar-γ in mice subjected to induction of Diabetes Mellitus and Periodontitis. Methodology: 192 male C57BL/6J mice, 8 weeks old and weighing 22g, were distributed in the groups: DM, DM_P, P, and C. DM was induced by the combination of a high-fat diet (56 days before the induction of Periodontitis) and streptozotocin injection, 28 days before the induction of Periodontitis, which occurred due to the combination of ligation and infection by Porphyromonas gingivalis (P.g). Body weight and postprandial blood glucose levels of all animals were assessed weekly. Twelve animals in each group were euthanized in the experimental periods Zero, 7, 14 and 21 days after P. Biochemical parameters were measured in plasma. The loss of periodontal bone volume in the animals was analyzed by micro-CT. In all groups and periods, Ppar-γ levels were evaluated, in addition to Tnf -α, through: (I) quantification of systemic transcriptional levels (mRNA in leukocytes), systemic translational levels (protein levels in leukocytes); in addition to periodontal
transcriptional (gingival mRNA) and translational (gingival immunohistochemistry). Gingival tissue morphometry and histological evaluation of the liver and kidney were performed. The experimental DM model was successful, proven by high levels of postprandial glycemia and total cholesterol in diabetic groups. The success of the experimental model of periodontitis was proven by micro-CT given the greater alveolar bone loss in the groups with P. Pparg gene expression in leukocytes was significantly higher in the “C” group at time Zero and 7 days. In the longitudinal follow-up, the “P” group was the one with the lowest systemic levels of Pparg mRNA; and the largest for Tnfa. The expression of the Pparg gene in the gingiva was significantly higher in the “P” group in 14 days, and of the Tnfa gene in the same period there was a tendency for higher expression in the “DM_P” group. In this same group, in 7 days there was a significantly higher systemic protein expression of Tnf-α. There was a tendency for more immunopositive cells for Ppar-γ in group “C” at all periods, and for Tnf-α in groups with at least one of the diseases at 7 and 21 days. There was a higher percentage of inflammatory cells and blood vessels in the gums of the “DM_P” and “P” groups in 21 days. Lipid droplets or vacuoles were observed in 21 days in the liver and kidney of animals with “DM” and “DM_P” compared to the group "C". It is concluded that systemic Pparg mRNA and protein Ppar-γ levels in the gingiva were higher in group “C”. In contrast, Tnfa had systemic gene expression mainly elicited by the “P” group, and plasma protein expression by the “DM_P” group in 7 days, in agreement with a higher percentage of inflammatory cells and blood vessels in the gingival tissue in 21 days.
Descrição
Idioma
Português
Como citar
Rimachi Hidalgo MA. Avaliação da expressão gênica e proteica do Receptor Ativado por Proliferador de Peroxissoma Gama em modelo murino no Diabetes Mellitus e Periodontite [tese de doutorado]. Araraquara: Faculdade de Odontologia da UNESP; 2024.