Estudo da interação da proteína de matriz (M) do vírus sincicial respiratório humano (hRSV) com resveratrol: pesquisa de moléculas candidatas para o desenho de antivirais
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Data
2021-03-18
Autores
Orientador
Fossey, Marcelo Andres 
Souza, Fátima Pereira
Caruso, Ícaro Putinhon
Coorientador
Pós-graduação
Biofísica Molecular - IBILCE
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Dissertação de mestrado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
O Vírus Sincicial Respiratório Humano é a principal causa de internação por doenças respiratórias entre menores de 5 anos de idade, mais comumente durante a primeira infecção, sendo responsáveis por quadros de pneumonia ou bronquiolite. Atualmente, não há vacinas ou tratamento eficazes contra a doença. Dentre as proteínas codificadas por esse vírus, a proteína de Matriz faz parte da estrutura interna do vírion e é composta por 256 resíduos de aminoácidos e trata-se de uma proteína fosforilada e não glicosilada que envolve todo o complexo ribonucleoproteico (RNP, composto pelas proteínas L, N e P), localizando-se entre este complexo e a bicamada lipídica viral com função primordial no brotamento da partícula viral e disseminação do vírus. O Resveratrol (trans-3,40,5-trihidroxiestilbeno) é uma fitoalexina encontrado naturalmente em muitas fontes alimentares comuns, incluindo uvas, amoras e amendoins e possuí inúmeras vantagens e efeitos na saúde humana, incluindo a propriedade antiviral. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a interação da proteína de matriz (M) e o Resveratrol. Então, a proteína foi obtida de forma recombinante, purificada através de cromatografia de afinidade e exclusão molecular, verificada por eletroforese SDS-PAGE e a análise da estrutura secundaria e de interação da proteína com o ligante foram realizadas respectivamente por dicroísmo circular e espectroscopia de fluorescência. A proteína purificada com massa molecular (30 kDa). Os espectros de dicroísmo circular (CD) mostraram que a proteína M é composta majoritariamente de estruturas em folha β, sendo 44% de estruturas beta, 23% de estruturas alfa hélice, e 33% de estruturas randoim coil. Os resultados de interação proteína/ligante mostraram uma interação do tipo hidrofófica onde a Kb do complexo aumenta proporcionalmente com aumento da temperatura 5,2x10-3 M-1 evidenciando uma interação média/alta sendo n=1, ou seja, 1 ligante para 1 proteína. O presente trabalho sugere a interação do Resveratrol com a proteína M, corroborando dados que indicam que esse antioxidante interfere na montagem viral e na formação de vírus maduros, etapa mediada pela proteína M. Pela escassez de novos fármacos com ação antiviral, o Resveratrol poderá ser uma alternativa para o tratamento de infecção pelo HRSV.
Resumo (inglês)
Human Respiratory Syncytial Virus is the main cause of hospitalization for respiratory diseases among children under 5 years of age, most commonly during the first infection, being responsible for pneumonia or bronchiolitis. Currently, there are no effective vaccines or treatments against the disease. Among the proteins encoded by this virus, the Matrix protein is part of the internal structure of the vírion and is composed of 256 amino acid residues and is a phosphorylated and non-glycosylated protein that involves the entire ribonucleoprotein complex (RNP, composed of proteins L, N and P), located between this complex and the viral lipid bilayer with primary function in the sprouting of the viral particle and spread of the virus. Resveratrol (trans-3,40,5- trihydroxystylbene) is a phytoalexin found naturally in many common food sources, including grapes, blackberries and peanuts and has numerous benefits and effects on human health, including antiviral property. The objective of this work was to characterize the interaction of matrix protein (M) and Resveratrol. Then, the protein was obtained recombinantly, purified through affinity chromatography and molecular exclusion, verified by SDS-PAGE electrophoresis and the analysis of the secondary structure and interaction of the protein in the ligand were performed respectively by circular dichroism and fluorescence spectroscopy. The purified protein with molecular weight (30 kDa). The circular dichroism (CD) spectra showed that the M protein is mainly composed of β-leaf structures, with 44% beta structures, 23% alpha helix structures, and 33% randoim coil structures. The results of protein/ligand interaction showed a hydrophobic type interaction where the Kb of the complex increases proportionally with an increase in temperature of 5,2x10-3 M-1, showing a medium/high interaction being n = 1, that is, 1 ligand for 1 protein. The present work suggests the interaction of Resveratrol with protein M, corroborating data that indicate that this antioxidant interferes with viral assembly and the formation of mature viruses, a step mediated by protein M. Due to the scarcity of new drugs with antiviral action, Resveratrol may be an alternative for the treatment of HRSV infection.
Descrição
Idioma
Português