Abordagem proteômica da gestação inicial em búfalas
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Data
2023-01-18
Autores
Orientador
Oba, Eunice 
Coorientador
Pós-graduação
Biotecnologia Animal - FMVZ
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
O objetivo deste estudo foi identificar marcadores séricos, urinários e de fluídos uterinos para o diagnóstico precoce da gestação em búfalas. Foram utilizadas 44 fêmeas bubalinas submetidas à sincronização hormonal do estro e divididas aleatoriamente em dois grupos: gestante (n = 30) e não-gestante (n = 14). O grupo gestante foi inseminado artificialmente e dividido em dois outros grupos: P12 (n = 15) e P18 (n = 15), dos quais foram colhidas amostras de fluido uterino, urina e sangue aos 12 e 18 dias após a inseminação durante o abate. Entretanto, no momento da colheita de material, apenas 8 animais de cada grupo apresentaram lavado uterino com a presença de embrião, confirmando a gestação, o que diminuiu o n amostral para 8 (P12 = 8; P18 = 8). O grupo não-gestante também foi redividido em dois grupos no final da sincronização: NP12 (n = 7) e NP18 (n = 7) e amostras de fluido uterino, urina e sangue colhidos no mesmo momento estabelecido para o grupo gestante. Nas amostras de sangue, o plasma foi separado, e a progesterona foi determinada por radioimunoensaio. O restante das amostras e o plasma foram preparados para digestão tríptica e submetidos a espectrometria de massas, por abordagem shotgun. Com relação a progesterona foi observado maior concentrações no grupo gestante (G12: 8,2 ± 1,5 ng/mL; G18: 14,4 ± 1,2 ng/mL) quando comparado aos não-gestante (NG12: 3,7 ± 1,0 g/mL; NG18: 3,9 ± 1,1 ng/mL), respectivamente. O fluido uterino apresentou um total de 1.068 proteínas em ambos os grupos, sendo que 941 diferiram entre os grupos. Na urina foram encontradas 798 proteínas considerando todos os grupos, sendo que 660 diferentes entre eles. As funções moleculares das proteínas relatadas no fluido uterino e urina foram atividade de ligação e catalítica; nos processos biológicos, o processo celular e regulação biológica foram os principais; e entidade anatômica foi o principal componente celular. Concluímos que a determinação da concentração plasmática de progesterona em búfalas pode ser considerada um método de diagnóstico gestacional alternativo quando os demais métodos não podem ser aplicados no período. Já com relação a análise proteômica nossos resultados mostraram mudanças proteicas qualitativas e quantitativas no fluido uterino e urina de búfalas gestantes e não-gestantes, sendo as principais funções destas proteínas atuar no transporte e metabolismo celular, remodelação endometrial necessária para o alongamento do concepto, proteção embrionária e degradação de proteínas defeituosas, funções estas necessárias para manter a receptividade uterina durante o estabelecimento da gestação.
Resumo (inglês)
This study aimed to identify serum, urinary, and uterine fluid markers for early pregnancy diagnosis in buffaloes. Forty-four female buffaloes submitted to hormonal synchronization of estrus and randomly divided into two groups: pregnant (n = 30) and non-pregnant (n = 14) were used. The pregnant group was artificially inseminated and divided into two other groups: P12 (n = 15) and P18 (n = 15), from which uterine fluid, urine, and blood samples were collected at 12 and 18 days after insemination during slaughter. However, at the time of material collection, only eight animals from each group had uterine washings with an embryo confirming the pregnancy, which reduced the sample number to 8 (P12 = 8; P18 = 8). The non-pregnant group was also divided into two groups at the end of the synchronization: NP12 (n = 7) and NP18 (n = 7), and uterine fluid, urine, and blood samples were collected at the same time established for the pregnant group. In blood samples, plasma was separated, and progesterone was determined by radioimmunoassay. The rest of the samples and the plasma were prepared for tryptic digestion and submitted to mass spectrometry by shotgun approach. Regarding progesterone, higher concentrations were observed in the pregnant group (G12: 8.2 ± 1.5 ng/mL; G18: 14.4 ± 1.2 ng/mL) when compared to the non-pregnant group (NG12: 3.7 ± 1.0 g/mL; NG18: 3.9 ± 1.1 ng/mL), respectively. The uterine fluid had a total of 1,068 proteins in both groups, with 941 differing between groups. In urine, 798 proteins were found considering all groups, with 660 differences between them. Molecular functions of proteins reported in uterine fluid and urine were binding and catalytic activity; in biological processes, the cellular process and biological regulation were the main ones; and the anatomical entity was the main cellular component. We conclude that the determination of the plasma concentration of progesterone in buffaloes can be considered an alternative method of gestational diagnosis when the other methods cannot be applied in the period. Regarding the proteomic analysis, our results showed qualitative and quantitative protein changes in the uterine fluid and urine of pregnant and non-pregnant buffaloes, with the main functions of these proteins acting in cell transport and metabolism, endometrial remodeling necessary for conceptus elongation, protection, and degradation of defective proteins, functions essential to maintaining uterine receptivity during the establishment of pregnancy.
Descrição
Idioma
Português