Ação do mirceno no modelo de Retocolite Ulcerativa induzida por dextran sulfato de sódio em camundongos

Assunção, Renata [UNESP]

Ação do mirceno no modelo de Retocolite Ulcerativa induzida por dextran sulfato de sódio em camundongos

Arquivos

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Data

2023-03-26

Autores

Assunção, Renata

Orientador

Hiruma-Lima, Clélia Akiko

Rocha, Lúcia Regina Machado da

Pós-graduação

Biologia Geral e Aplicada - IBB

Editor

Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Tipo

Dissertação de mestrado

Direito de acesso

Acesso aberto

Resumo

Resumo (português)

A retocolite ulcerativa (RCU) é uma doença inflamatória intestinal, caracterizada por inflamação crônica e pelo desenvolvimento de úlceras no cólon. A inflamação provoca infiltração de neutrófilos, aumento do estresse oxidativo e ativação de vias inflamatórias. Apesar de ser uma doença que está se tornando cada vez mais comum ao redor do mundo, ainda não existe um tratamento efetivo. O mirceno é um monoterpeno com comprovada ação antioxidante, anti-inflamatório e gastroprotetora em estudos pré-clínicos in vivo e in vitro. Esse trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do mirceno no quadro de RCU aguda em camundongos C5BL/6J machos. Para a realização desse estudo foram usadas duas concentrações (2% e 2.5%) de Dextran Sulfato de Sódio (DSS), assim como diferentes doses do mirceno (3.75, 7.5, 11.25, 50, 100 e 200 mg/kg). Assim como foram utilizados camundongos machos C5BL/6J (n=15) que foram induzidos por DSS durante 7 dias consecutivos ofertados no bebedouro. O tratamento com o mirceno (pela via oral) foi realizado concomitantemente a indução da colite com DSS. Ao longo do período de indução mais tratamento, foi analisada a progressão dos sintomas da RCU através do Índice de Desenvolvimento da Doença (IDD). Através da análise do soro e do tecido obtido do cólon foram realizadas observações morfometrias (massa e comprimento do cólon) e bioquímicas por meio dos marcadores de inflamação (mieloperoxidase - MPO, malondialdeído - MDA, citocinas anti-inflamatórias – IL 4, 5, 10, 13 e 33) e do estresse oxidativo (glutationa redutase - GSH, superóxido dismutase - SOD e catalase – CAT). Para a análise estatística foi realizado teste de Shapiro-Wilk para determinação de normalidade e ANOVA de uma via para comparação de três ou mais grupos, seguidos do teste de Dunnett ou Tukey, ou teste de Wilcoxon, para conjuntos de dados não paramétricos. Com valor de significância mínimo de p < 0,05. As diferentes concentrações de DSS (2% vs 2.5%) resultaram no aumento significativo do IDD no 6º de tratamento. O tratamento dos animais com mirceno promoveu aumento do IDD a partir do 5º dia em ambas concentrações de DSS. Se observou um encurtamento do comprimento dos cólons dos animais submetidos ao DSS em ambas concentrações sendo que nos animais tratados com DSS a 2.5% houve uma redução significativa do comprimento em comparação com os animais tratados com DSS a 2%. Após o tratamento, houve aumento da massa do cólon e baço (DSS 2%), estomago e baço (DSS 2.5%) dos animais submetidos as diferentes concentrações de DSS em relação aos animais brancos. As análises bioquímicas demonstraram que a aplicação do DSS a 2% foi capaz de reduzir os níveis de GSH e SOD assim com a IL-4 no grupo de animais tratados com o veículo em comparação com os animais branco. A indução do DSS a 2.5% reduziu os níveis de GSH dos animais tratados com mirceno e aumentou a atividade de MPO no grupo de animais que recebeu mirceno (200 mg/kg) em comparação com branco. Através dos resultados desse trabalho foi possível concluir que a indução com DSS em ambas concentrações foi capaz de elevar o IDD, porém o tratamento dos animais com mirceno nas doses utilizadas não foi capaz de proteger os animais dos danos causados pelo DSS.

Resumo (inglês)

Ulcerative colitis (UC) is an inflammatory bowel disease characterized by chronic inflammation and the development of ulcers in the colon. Inflammation causes neutrophil infiltration, increased oxidative stress, and activation of inflammatory pathways. Despite being a disease that is becoming increasingly common around the world, there is still no effective treatment. Myrcene is a monoterpene with proven antioxidant, anti-inflammatory and gastroprotective action in preclinical in vivo and in vitro studies. This study aims to evaluate the effect of myrcene on acute UC in male C5BL/6J mice. To carry out this study, two concentrations (2% and 2.5%) of Sodium Dextran Sulfate (DSS) were used, as well as different doses of myrcene (3.75, 7.5, 11.25, 50, 100 and 200 mg/kg). As well as male C5BL/6J mice (n=15) that were induced by DSS for 7 consecutive days offered in the drinking fountain. Treatment with myrcene (by mouth) was performed concomitantly with the induction of colitis with DSS. Throughout the period of induction plus treatment, the progression of UC symptoms was analyzed using the Disease Development Index (IDD). By analyzing the serum and the tissue obtained from the colon, morphometry (colon weight and length) and biochemical observations were performed using inflammation markers (myeloperoxidase - MPO, malondialdehyde - MDA, anti-inflammatory cytokines - IL 4, 5, 10, 13 and 33) and oxidative stress (glutathione reductase - GSH, superoxide dismutase - SOD and catalase - CAT). For statistical analysis, the Shapiro-Wilk test was used to determine normality and one-way ANOVA to compare three or more groups, followed by the Dunnett or Tukey test, or the Wilcoxon test, for non-parametric data sets. With a minimum significance value of p < 0.05. The different concentrations of DSS (2% vs 2.5%) resulted in a significant increase in the IDD on the 6th day of treatment. The treatment of animals with myrcene promoted an increase in the IDD from the 5th day on in both DSS concentrations. A shortening of the length of the colons of the animals submitted to DSS in both concentrations was observed and, in the animals, treated with DSS at 2.5% there was a significant reduction of the length in comparison with the animals treated with DSS at 2%. After treatment, there was an increase in mass of the colon and spleen (DSS 2%), stomach and spleen (DSS 2.5%) of animals submitted to different concentrations of DSS compared to white animals. Biochemical analyzes demonstrated that the application of 2% DSS was able to reduce the levels of GSH and SOD as well as IL-4 in the group of animals treated with the vehicle compared to the white animals. The induction of 2.5% DSS reduced the GSH levels of the myrcene-treated animals and increased the MPO activity in the group of animals that received myrcene (200 mg/kg) compared to the white group.