Aplicação do ensaio de sequenciamento genético "Nemabioma" como teste de diagnóstico para nematódeos parasitos de bovinos

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Data

2017-02-03

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Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

As perdas potenciais pelas infecções por nematódeos em bovinos no Brasil foram estimadas em $7,1 bilhões por ano. Indiscutivelmente, deve-se fazer o uso criterioso das drogas disponíveis, assim como o desenvolvimento de novas formulações, para enfrentar a problemática da resistência anti-helmíntica. O método atualmente empregado para o teste de medicamentos é invasivo e, portanto, enfrenta dificuldades em se adequar aos novos modelos em bem-estar animal. Outras técnicas utilizadas são as contagens de ovos de nematódeos por grama de fezes (OPGs) pré e pós-tratamento, que apresentam resultados não confiáveis para este propósito. Com fins científicos, emprega-se a PCR convencional ou a PCR em tempo real, técnicas quali e semi- quantitativa, respectivamente. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a comunidade parasitária das larvas em terceiro estádio após coproculturas e a composição do bioma de nematódeos adultos presentes no trato gastrointestinal. As proporções das larvas foram avaliadas por meio da tradicional morfologia e o novo método de sequenciamento “Nemabioma”, enquanto as contagens e classificações dos vermes adultos foram realizadas pelos clássicos métodos morfológicos. Neste experimento, utilizaram-se sete bovinos mestiços, naturalmente infectados, entre oito e 12 meses de idade. Contagens de OPG foram realizadas a cada dois dias, do 14 ao 28 dia do estudo. As culturas de larvas foram realizadas utilizando-se as amostras de fezes colhidas nos dias 14, 16, 20, 24 e 28 do estudo. As larvas L3 foram sempre extraídas após 10 dias de cultura. Os animais foram experimentalmente eutanasiados no dia 28 para a subsequente colheita e classificação de helmintos adultos. Este é o primeiro estudo que relaciona as comunidades parasitárias de nematódeos em amostras de larvas e helmintos adultos utilizando o “Nemabioma”. Os resultados deste estudo indicam que as espécies Haemonchus placei e Oesophagostomum radiatum são superestimados na comunidade das L3 avaliadas pelo “Nemabioma”. Por outro lado, Cooperia punctata e Trichostrongylus axei aparecem sub-representados. Tal fato explica-se, principalmente, pela diferença de fecundidade entre as fêmeas das várias espécies de nematódeos adultos que parasitam um mesmo animal.
The potential detrimental effects of cattle nematode infections in Brazil have been estimated at USD 7.1 billion a year. It is undeniable, the necessity of appropriate drug use and the development of new formulations, to face the problematic of anthelmintic drug resistance. The current method for testing new drugs is both invasive and represents threats against recent animal welfare models. Other approaches currently used are Fecal Egg Counts (FECs) pre and post treatment, which are not reliable. Occasionally, conventional and real-time PCR are employed, which are non-quantitative and semi-quantitative techniques respectively. The objective of this study was to evaluate the relationship between the parasite community present in cultured fecal samples, and the composition of adult worms present in the gastrointestinal tract. Species proportions in larvae were assessed with the traditional morphological analysis and a recently developed “Nemabiome” sequencing assay, while the adult species proportions were assessed with classical morphological approaches. To this end, an experiment using natural infected bovines was designed. Seven crossbred calves were selected from eight to 12 months of age. FECs were done every 2 days, from the 14th to the 28th day of the study. Cultures of larvae were performed using fecal samples extracted on days +14, +16, +20, +24 and +28. The L3’s were always extracted after 10 days of culture. The animals were necropsied on day +28 for collection and subsequent classification and counting of adult worms. This was the first time the comparison among the community of nematodes species present in larvae samples, and adult worms, has been described in the literature using these techniques. Differences in fecundity between nematode species can influence the apparent composition of larvae in the feces, how this relates to the actual adult worm burden is crucial to understanding the actual nematode infection, and the resulting implications

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Palavras-chave

Biologia Molecular, Nematódeo, Strongylida, Molecular Biology, Nematode, Strongylida

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