Morfologia celular e imunologia em crustáceos (Decapoda: Aeglidae) endêmicos sul-americanos: o status de conservação de espécies em bacias hidrográficas dos estados de São Paulo e Paraná

Abstract

Análises de morfologia e viabilidade celular na hemolinfa são ferramentas empregadas com crustáceos para diagnosticar as condições biológicas de espécies ambientalmente impactadas através do “estado de saúde” dos animais. Os ecossistemas aquáticos neotropicais se destacam por concentrarem um maior número de espécies endêmicas ameaçadas de extinção por ações antrópicas. Com base nisso, a morfologia e taxa de apoptose dos hemócitos (células do sistema imune presentes na hemolinfa) dos anomuros de água doce Aegla spp. foram estudadas em áreas mais e menos impactadas por atividades humanas. As coletas dos espécimes foram realizadas em três locais: Riacho Pedra Preta (Avaré-SP); Salto Puxa Nervos (Tibagi-PR) e Rio Iapó (Castro-PR). A hemolinfa dos animais foi extraída para análise dos processos de apoptose através de citometria de fluxo e microscopia de fluorescência, utilizando um protocolo desenvolvido durante este projeto e foi feita uma descrição morfológica dos hemócitos através de microscopia óptica. Para a caracterização das áreas de estudo, foram realizadas análises de diversos parâmetros abióticos da água dos ambientes, além da presença e concentração de substâncias tóxicas. Foram observados e descritos 3 tipos celulares de hemócitos: hialinócitos, semigranulócitos e granulócitos. As taxas de apoptose se mostraram significativamente maiores nos espécimes de Avaré-SP em comparação com os de Castro-PR, entretanto, não houve diferenças significativas entre os espécimes de Tibagi-PR e demais locais. Avaré teve os piores índices de qualidade de água, enquanto Castro e Tibagi apresentaram qualidade regular. Portanto, a combinação das análises de hemolinfa com os fatores ambientais pôde fornecer o “espelhamento” do status ambiental vs status imunológico de Aegla spp, o que poderia ser replicado para outros crustáceos.

Analyses of morphology and cell viability in hemolymph are tools used with crustaceans to diagnose the biological conditions of environmentally impacted species by accessing their "health status". Neotropical aquatic ecosystems stand out for concentrating a greater number of endemic species threatened with extinction by human actions. Based on this, the morphology and apoptotic cell ratio of hemocytes (immune system cells present in the hemolymph) of freshwater anomura Aegla spp. were studied in areas more and less impacted by human activities. Specimens were collected in three locations: Riacho Pedra Preta (Avaré-SP); Salto Puxa Nervos (Tibagi-PR) and Rio Iapó (Castro-PR). The hemolymph of the animals was extracted for analysis of the apoptotic processes by flow cytometry and fluorescence microscopy, using a protocol developed during this project, and a morphological description of the hemocytes was made by optical microscopy. For the characterization of the study areas, analyses of several abiotic parameters of the water in the environments were carried out, in addition to the presence and concentration of toxic substances. Three types of hemocytes have been observed and described: hyalinocytes, semigranulocytes and granulocytes. The apoptotic ratios were significantly higher in the specimens from Avaré-SP compared to those from Castro-PR, however, there were no significant differences between the specimens from Tibagi-PR and other sites. Avaré had the worst water quality indexes, while Castro and Tibagi had regular quality. Therefore, the combination of hemolymph analysis with environmental factors could provide the "mirroring" of the environmental status vs immune status of Aegla spp, which could be replicated for other crustaceans.