Efeito da vitamina D sobre diferenciação de linfócitos T reguladores induzida por interação entre receptor TNFR2 e TNF de membrana presente em monócitos M2 de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Introdução: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez caracterizada por ativação de monócitos com perfil inflamatório (M1) em detrimento do perfil anti-inflamatório M2, resultando em níveis elevados de citocinas pró-inflamatórias, como o fator de necrose tumoral (TNF-α). O TNF-α é produzido como uma proteína de transmembrana (mTNF-α) que pode ser proteoliticamente clivada pela enzima conversora de TNF (TACE) dando origem ao TNF solúvel (TNF-α). A ligação de TNF-α com os receptores TNFR1 e TNFR2 na superfície celular ativa diferentes vias de sinalização. TNFR1 pode ser ativado por ligação com ambos mTNF-α e TNF-α, enquanto TNFR2 é principalmente ativado por mTNF-α. O TNFR2 é predominantemente expresso por células T reguladoras CD4+/FoxP3+ e, a co-expressão de CD25 com TNFR2 identifica células com maior capacidade supressora. Em vista disso, o uso de moduladores da resposta inflamatória como a vitamina D, no tratamento de células de gestantes com PE pode ser importante para melhorar a resposta inflamatória através da ativação de células com perfil M2 e Treg, capazes de modular e suprimir a inflamação presente nessa síndrome da gestação. Objetivo: O presente projeto tem como objetivo avaliar se o tratamento com vitamina D aumenta a expressão de monócitos M2 em gestantes portadoras de PE e, consequentemente, induz aumento de linfócitos Treg por essas gestantes. Sujeitos e Métodos: O sangue periférico de 10 gestantes portadoras de PE e 10 mulheres saudáveis, não-grávidas (NP) foi obtido e as células mononucleares (PBMCs) foram cultivadas na presença ou ausência de vitamina D por 24h, sendo a expressão por monócitos dos receptores CD14, CD163, CD206, TNFR2 e de mTNF-α e a expressão de linfócitos T reguladores CD4, CD25, TNFR2 e FoxP3 determinada por citometria de fluxo. Os resultados foram analisados por testes não paramétricos com nível de significância de 5%. Resultados: Monócitos e linfócitos cultivados juntos na presença ou ausência de VD apresentaram diferença significativa em relação a mulheres NP para os parâmetros, mTNF-α, CD163, FoxP3 e FoxP3+TNFR2. Além disso, o tratamento com VD aumentou a percentagem de linfócitos expressando FoxP3 e FoxP3+TNFR2. Conclusão: Os resultados preliminares indicam que a VD tem potencial de melhorar a resposta inflamatória em gestantes pré-eclâmpticas através do aumento da expressão de células com perfil anti-inflamatório, sendo elas, tanto monócitos M2 como linfócitos Treg. Sendo assim, o uso da vitamina D, poderá induzir a modulação da resposta inflamatória observada na PE, e possivelmente, poderá, futuramente, ser associada ao tratamento dessa importante síndrome da gestação.

Resumo (inglês)

Introduction: Preeclampsia (PE) is a pregnancy-specific syndrome characterized by the activation of monocytes with a pro-inflammatory (M1) phenotype at the expense of the anti-inflammatory M2 phenotype, resulting in elevated levels of pro-inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor-alpha (TNF-α). TNF-α is initially produced as a membrane-bound protein (mTNF-α), which can be proteolytically cleaved by the TNF-α converting enzyme (TACE), generating its soluble form (sTNF-α). The binding of TNF-α to its receptors, TNFR1 and TNFR2, on the cell surface activates distinct signaling pathways. TNFR1 can be activated by both mTNF-α and sTNF-α, whereas TNFR2 is primarily activated by mTNF-α. TNFR2 is predominantly expressed by CD4⁺/FoxP3⁺ regulatory T cells (Tregs), and the co-expression of CD25 and TNFR2 identifies cells with enhanced suppressive capacity. In this context, the use of inflammatory response modulators, such as vitamin D, in the treatment of cells from pregnant women with PE may be important for improving the inflammatory profile by promoting the activation of M2-like monocytes and Treg cells, which are capable of modulating and suppressing the inflammation present in this gestational syndrome. Objective: This study aims to evaluate whether treatment with vitamin D increases the expression of M2 phenotype monocytes in pregnant women with PE and, consequently, induces an increase in Treg lymphocytes. Subjects and Methods: Peripheral blood was collected from 10 pregnant women with PE and 10 healthy non-pregnant (NP) women. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated and cultured in the presence or absence of vitamin D for 24 hours. Monocyte expression of CD14, CD163, CD206, TNFR2, and mTNF-α, as well as Treg lymphocyte expression of CD4, CD25, TNFR2, and FoxP3, were assessed by flow cytometry. Data were analyzed using non-parametric statistical tests, with a significance level set at 5%. Results: Monocytes and lymphocytes cultured together in the presence or absence of vitamin D showed significant differences compared to NP women for the following parameters: mTNF-α, CD163, FoxP3, and FoxP3⁺TNFR2. Moreover, vitamin D treatment increased the percentage of lymphocytes expressing FoxP3 and FoxP3⁺TNFR2. Conclusion: Preliminary results suggest that vitamin D has the potential to improve the inflammatory response in preeclamptic pregnant women by increasing the expression of cells with anti-inflammatory profiles, namely M2 monocytes and regulatory T cells. Therefore, vitamin D may contribute to the modulation of the inflammatory response observed in PE and, potentially, could be considered in future therapeutic strategies for this important pregnancy-related syndrome.

Palavras-chave

Vitamina D, Monócitos M2, Citometria de fluxo, Células T reguladoras, Pré-eclâmpsia

Idioma

Português

Citação

VEIGA, Mariana Romão. Efeito da vitamina D sobre diferenciação de linfócitos T reguladores induzida por interação entre receptor TNFR2 e TNF de membrana presente em monócitos M2 de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia. Supervisora: Maria Terezinha Serrão Peraçoli. 2025. Relatório (Pós-doutorado) - Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, 2025