Adição de coenzima Q10 e melatonina em diluente para congelação de sêmen ovino

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Data

2021-11-26

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Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

Oxidative stress can affect sperm quality during freezing. The aim of this experiment was to observe the effect of Coenzyme Q10 (CoQ10) and Melatonin addition in seminal extender on the sperm quality and pregnancy rate in sheep. Experiment 1: Ejaculates of 2 crossbred rams were used in 5 repetitions, forming 7 treatments: Control (pure seminal extender), C1 (0,175mM of CoQ10), C3 (0,35mM of CoQ10), C7 (0,7mM of CoQ10), M0,5 (0,5mM of melatonin), M1 (1mM of melatonin), M2 (2mM of melatonin). Semen was evaluated by computerassisted sperm analysis (CASA) at 0, 1, 2 and 3h, considering total motility (TM), progressive motility (PM) and percentage of rapid spermatozoa (PRS). Experiment 2: Ejaculates of 8 Dorper rams were used in triplicate, testing 4 treatments: Control (pure seminal extender), C1 (0,175mM of CoQ10), C3 (0,35mM of CoQ10) and C7 (0,7mM of CoQ10). Complete sperm analysis was performed after thawing by CASA and analysis of integrity and stability of plasma and acrosomal membranes, lipid peroxidation, mitochondrial potential and super oxide anions production by flow cytometry at 0 and 2h. Altogether, 198 ewes were inseminated by laparoscopy, divided into two treatments: control (n=98) e C7 (n=100), with subsequent pregnancy diagnosis. In experiment 1, all treatments were statistically inferior to control for TM parameter. Group C1 was statistically equal to control and other treatments were statistically inferior when compared to control for parameters PM and PRS. All treatments with melatonin were significantly lower, for all parameters evaluated at all moments. Regarding the moments, a difference was observed between all the evaluation moments for all parameters with a linear fall between the moments. It is concluded that CoQ10 were slightly superior to those of melatonin. In experiment 2 the parameters of TM, VAP and PRS of control group showed a statistical difference (p<0,05) between moments 0 and 2h. C3 group was statistically superior for the VAP parameter, analyzed by CASA. Animals 4, 7 and 8 were superior for the parameters TM, PM and PRS, being selected for artificial insemination stage. At moment 0h in flow cytometry, C7 group showed a higher percentage of cells with high mitochondrial potential (p<0,05). At 2h, C1 and C7 groups were statistically higher and C3 lower compared to the control. A higher pregnancy rate was observed for C7 (52%) when compared to the control (38%). It is concluded that CoQ10 is able to protect sperm cell and increase the pregnancy rate in sheep consequently
Durante a congelação seminal o estresse oxidativo pode influenciar negativamente a qualidade espermática. O objetivo desse experimento foi observar o efeito da adição de Coenzima Q10 (CoQ10) e Melatonina no diluente seminal sobre a qualidade espermática e taxa de prenhez em ovinos. Experimento 1: Foram utilizados o ejaculado de 2 carneiros mestiços, em 5 repetições, formando 7 tratamentos: Controle (diluente puro), C1 (0,175mM de CoQ10), C3 (0,35mM de CoQ10), C7 (0,7mM de CoQ10), M0,5 (0,5mM de melatonina), M1 (1mM de melatonina), M2 (2mM de melatonina). O sêmen foi avaliado pelo sistema computadorizado de análise espermática (CASA) nos momentos 0, 1, 2 e 3h, considerando motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e porcentagem de espermatozoides rápidos (RAP). Experimento 2: Foram utilizados os ejaculados de 8 carneiros da raça Dorper, em triplicata, testando-se 4 tratamentos: Controle (diluente puro), C1 (0,175mM de CoQ10), C3 (0,35mM de CoQ10) e C7 (0,7mM de CoQ10). Foi realizada análise espermática completa pós-descongelação pelo CASA e análise de integridade e estabilidade de membranas plasmática e acrossomal, peroxidação lipídica, potencial mitocondrial e produção de ânions superóxido por citometria de fluxo, nos momentos 0 e 2h. Foram inseminadas 198 ovelhas por meio de laparoscopia, divididas em dois tratamentos: controle (n=98) e C7 (n=100), com posterior diagnóstico de gestação. No experimento 1, todos os tratamentos foram estatisticamente inferiores ao controle para o parâmetro MT. Para os parâmetros MP e RAP, C1 mostrou-se estatisticamente igual ao controle, e os demais tratamentos foram estatisticamente inferiores, quando comparados ao controle. Todos os tratamentos de Melatonina foram significativamente inferiores, para todos os parâmetros avaliados, em todos os momentos. Com relação aos momentos, foi observado diferença entre todos os momentos de avaliação, para todos os parâmetros com queda linear entre os momentos. Conclui-se que os tratamentos de CoQ10 foram ligeiramente superiores aos de Melatonina. No experimento 2, os parâmetros MT, VAP e RAP do controle demonstraram diferença estatística (p<0,05) entre os momentos 0h e 2h. C3 mostrou-se superior estatisticamente para o parâmetro VAP, analisado pelo CASA. Os animais 4, 7 e 8 demonstraram-se superiores para os parâmetros MT, MP e RAP, sendo selecionados para a etapa de inseminação artificial. No momento 0h da citometria de fluxo, C7 demonstrou maior porcentagem de células com alto potencial mitocondrial (p<0,05). No momento 2h, C1 e C7 foram estatisticamente superiores e C3 inferior, comparados ao controle. Foi observada maior taxa de prenhez para C7 (52%) quando comparado ao controle (38%). Conclui-se que a CoQ10 é capaz de proteger a célula espermática e, consequentemente, aumentar a taxa de prenhez em ovinos.

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Palavras-chave

Artificial insemination, Pregnancy rate, Seminal quality, Frozen semen., Análise do sémen., Antioxidante, Carneiro, Inseminação artificial, Prenhez, Qualidade seminal, Sêmen congelado

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