Avaliação de apoptose de novo inibidor de histona deacetilase (HDACi 1-2), em comparação com o comercial Vorinostat, em células de câncer cervical associada com o papilomavírus humano (HPV)

Abstract

Nas últimas décadas, tem havido um crescente interesse no papel das modificações epigenéticas no processo de desenvolvimento do câncer. Entre essas modificações, a acetilação das histonas emerge como um processo regulado pelas enzimas histona deacetilases (HDAC) e histona acetiltransferases (HAT), desempenhando um papel crucial na regulação epigenética, permitindo o controle da expressão dos genes. Os papilomavírus humano (HPVs) são pequenos vírus de DNA de fita dupla sem envelope. Eles são os principais carcinógenos humanos, estando, intrinsecamente, ligados ao desenvolvimento de câncer em 4,5% dos pacientes diagnosticados em todo o mundo. Ensaios in vitro e in vivo demonstraram que HDACi pode ser uma terapia promissora para o câncer cervical relacionado ao HPV. No presente trabalho foi proposto o estudo de uma nova molécula sintetizada com potencial inibitório de HDAC, visando avaliar sua eficácia terapêutica frente ao câncer cervical associado com HPV. Com o objetivo verificar a atividade de molécula recém sintetizada de HDACi de histona deacetilase 1/2 comparada a um medicamento comercial Vorinostat® que também inibe essa mesma classe de HDAC, avaliando comparativamente seu efeito em monoterapia e em combinação, a fim de avaliar a eficácia do tratamento em monoterapia da nova molécula e verificar a possibilidade de sinergismo, aditivo ou antagonismo da terapia combinada em células de câncer cervical associado ao HPV 16 (SiHa e Caski) e em controles celulares de câncer cervical negativa para HPV (C33- A) e queratinócito normal de pele espontaneamente imortalizado (HaCaT). Com esse objetivo foi realizado ensaios de citotoxicidade por MTT para determinação de concentração dose-resposta e tempo-resposta de ambos os compostos (nova molécula e composto comercial), bem como a determinação do IC50 e o potencial efeito sinérgico, aditivo ou antagônico da terapia combinada, através de ensaios de MTT e análise de resultados utilizando Graph Pad Prism 5.1 e SinergyFinder. A molécula recém sintetizada HDACi apresentou melhor ação nas células infectadas com HPV16 SiHa e CasKi apresentando resultados promissores com curva dose resposta em tempo de tratamento de 72h. No tratamento combinado, os compostos apresentaram ação antagônica nas células de queratinócitos (HaCat) e nas células com a presença de HPV (SiHa).

The role of epigenetic modifications in the process of carcinogenesis has received much attention in recent years. Among them, histone acetylation is a process regulated by histone deacetylases (HDAC) and histone acetyltransferases (HAT), and plays an important role in epigenetic regulation, allowing the control of gene expression. In the present study, the study of a new synthesized molecule with HDAC inhibitory potential was proposed to verify its therapeutic capacity against cervical cancer associated with HPV. Human papillomaviruses (HPVs) are small, non-enveloped, double-stranded DNA viruses. They are the main human carcinogens, being intrinsically linked to the development of cancer in 4.5% of patients diagnosed with cancer worldwide. In vitro and in vivo trials demonstrated that HDACi may be a promising therapy for HPV-related cervical cancer. Therefore, the present study aimed to verify the activity of a newly synthesized histone deacetylase 1/2 HDACi molecule compared to the commercial drug Vorinostat, which also inhibits this same class of HDAC, comparatively evaluating its effect in monotherapy and in combination, the in order to evaluate the effectiveness of the monotherapy treatment of the new molecule and verify the possibility of synergism or antagonism of the combined therapy in cervical cancer cells associated with HPV 16 (SiHa and Caski) and in cellular controls of HPV-negative cervical cancer (C33- A) and spontaneously immortalized normal skin keratinocyte (HaCaT). With this objective, MTT cytotoxicity assays were carried out to determine the dose-response concentration and time-response of both compounds (new molecule and commercial compound), as well as the determination of the IC50 and the potential synergistic or antagonistic effect of the C33-A, combined therapy. Through MTT tests and analysis of results using Graph Pad Prism 5.1 and SinergyFinder. The newly synthesized HDACi molecule showed better action in cells infected with HPV16 SiHa and CasKi, presenting promising results with dose response curve with a treatment time of 72h. In the combined treatment, the compounds showed antagonistic action on keratinocyte cells (HaCat) and those with the presence of HPV (SiHa).