Publicação: Atividade in vitro do extrato rico em canabidiol na expressão gênica de citocinas inflamatórias e fatores neurotróficos de células-tronco mesenquimais equinas
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Data
Autores
Orientador
Amorim, Rogério Martins 
Coorientador
Pós-graduação
Medicina Veterinária - FMVZ
Curso de graduação
Título da Revista
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Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Dissertação de mestrado
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
As lesões ao sistema nervoso periférico são relativamente comuns na espécie equina, sendo as causas mais frequentemente observadas as originadas por processos traumáticos e inflamatórios. Muitas vezes lesões de maior gravidade, que apresentam uma maior distância entre as extremidades remanescentes ou um maior tempo de evolução, podem carecer de estímulos inflamatórios e neurotróficos, essenciais para o processo de limpeza dos debris celulares e preparo do ambiente para que ocorra a regeneração axonal. A instituição de terapias que visem o restabelecimento de um ambiente propício à regeneração, do mesmo modo que nutra e estimule o processo de reparo tecidual, muitas vezes se mostram benéficas. Assim, a interação do canabidiol com receptores, moléculas e vias de sinalização celulares têm se mostrado mecanismos importantes para o desencadeamento de respostas anti-inflamatórias e neurorregenerativa. Neste trabalho, hipotetizamos que as CTM equinas derivadas do tecido adiposo, quando cultivadas com extrato de Cannabis sativa rico em canabidiol, apresentam aumento do seu potencial imunomodulatório e neurorregenerativo. Assim, analisamos a capacidade do extrato rico em canabidiol em estimular as CTM-TA equinas à expressar genes relacionados ao seu potencial anti-inflamatório e neurotrófico em ambiente inflamatório. Foram utilizadas CTM derivadas do tecido adiposo equino proveniente do banco de células do nosso laboratório e previamente caracterizadas, demonstrando potencial de diferenciação nas linhagens adipogênica, osteogênica e condrogênica, expressão dos marcadores de superfície CD105, CD44 e CD90 e baixa expressão ou ausência dos marcadores CD34 e MHC II. As CTM de quatro animais distintos foram separadas em seis grupos experimentais e incubadas por 24 e 48 horas. A taxa de viabilidade e proliferação celular foi analisada por meio do teste de MTT, sendo realizada em seis grupos experimentais: Grupo controle (CTM-TA), Grupo veículo (CTM-TA + 0,05% DMSO) e grupos tratados com extrato rico em canabidiol nas doses de 3 µM (CTM-TA + CBD 3 µM), 5 µM (CTM-TA + CBD 5 µM), 7 µM (CTM-TA + CBD 7 µM) e 9 µM (CTM-TA + CBD 9 µM) nos momentos 24 e 48 horas. A análise da expressão gênica foi realizada nos seis grupos experimentais: Grupo controle (CTM-TA), Grupo estimulado com LPS (CTM-TA + 10 ng/ml LPS), Grupo veículo (CTM-TA + LPS + 0,05% DMSO) e grupos estimulados e tratados extrato rico em canabidiol nas doses de 3 µM (CTM-TA + 10 ng/ml LPS + CBD 3 µM), 5 µM (CTM-TA + 10 ng/ml LPS + CBD 5 µM) e 7 µM (CTM-TA + 10 ng/ml LPS + CBD 7 µM) em dois momentos distintos (24 e 48 horas). A viabilidade das CTM equinas se apresentou reduzida apenas quando cultivadas com o extrato rico em canabidiol na dose de 9µM por um período de 24 horas. Foi possível notar a redução na expressão dos genes relacionados às citocinas pró-inflamatórias IL-6 (P<0,001) e IL-1ß (P<0,05), assim como a redução de NGF (P<0,001). Os resultados obtidos indicam que o tratamento in vitro das CTM-TA equinas com extrato rico em canabidiol foi capaz de promover o aumento de sua capacidade imunomodulatória. Entretanto, não foi eficiente no aumento do potencial neurorregenerativo das CTM-TA equinas. Novos estudos devem ser realizados com diferentes arranjos experimentais para a melhor compreensão dos efeitos imunomoduladores e neuroregenerativos da estimulação in vitro dos receptores canabinoides das CTM-TA equinas.
Resumo (inglês)
Injuries to the peripheral nervous system are relatively common in the equine species, and the most frequently observed causes are those originating from traumatic and inflammatory processes. Often more severe lesions, which present a greater distance between the remaining extremities or a longer evolution time, may lack inflammatory and neurotrophic stimuli, essential for the process of cleaning cellular debris and preparing the environment for axonal regeneration. Thus, the institution of therapies that aim to restore an environment conducive to regeneration, as well as nourish and stimulate the tissue repair process, often prove to be beneficial. Thus, the interaction of cannabidiol with receptors, molecules and cellular signaling pathways have been shown to be important mechanisms for triggering anti-inflammatory and neuroregenerative responses. In this work, we hypothesized that equine MSCs derived from adipose tissue, when cultivated with Cannabis sativa extract rich in cannabidiol, show increased immunomodulatory and neuroregenerative potential. Thus, we analyzed the ability of the cannabidiol-rich extract to stimulate equine Ad-MSC to express genes related to its anti-inflammatory and neurotrophic potential in an inflammatory environment. MSCs derived from equine adipose tissue from the cell bank of our laboratory and previously characterized were used, demonstrating potential for differentiation in adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages, expression of surface markers CD105, CD44 and CD90 and low expression or absence of CD34 markers and MHC II. MSCs from four different animals were separated into six experimental groups and incubated for 24 and 48 hours. The cell viability and proliferation rate was analyzed using the MTT test, being performed in six experimental groups: Control Group (Ad-MSC), Vehicle Group (Ad-MSC + 0.05% DMSO) and groups stimulated and treated with extract rich in cannabidiol in doses of 3 µM (Ad-MSC + CBD 3 4 µM), 5 µM (Ad-CTM + CBD 5 µM), 7 µM (Ad-CTM + CBD 7 µM) and 9 µM (Ad-CTM + CBD 9 µM) at 24 and 48 hours. Gene expression analysis was performed in the six experimental groups: Control group (Ad-MSC), LPS-stimulated group (Ad-MSC + 10 ng/ml LPS), Vehicle group (Ad-MSC + LPS + 0.05% DMSO) and groups stimulated and treated with cannabidiol-rich extract at doses of 3 µM (Ad-MSC + 10 ng/ml LPS + CBD 3 µM), 5 µM (Ad-MSC + 10 ng/ml LPS + CBD 5 µM) and 7 µM (Ad-MSC + 10 ng/ml LPS + CBD 7 µM) at two different times (24 and 48 hours). The viability of equine MSCs was reduced only when cultivated with the extract rich in cannabidiol at a dose of 9µM for a period of 24 hours. It was possible to notice the reduction in the expression of genes related to the pro-inflammatory cytokines IL-6 (P<0.001) and IL-1ß (P<0.05), as well as the reduction of NGF (P<0.001). The results obtained indicate that the in vitro treatment of equine Ad-MSC with an extract rich in cannabidiol was able to promote an increase in its immunomodulatory capacity. However, it was not efficient in increasing the neuroregenerative potential of equine Ad-MSC. New studies should be carried out with different experimental arrangements for a better understanding of the immunomodulatory and neuroregenerative effects of in vitro stimulation of cannabinoid receptors of equine AdMSC.
Descrição
Palavras-chave
Cannabis, Imunomodulação, Neurorregeneração, Neurotrofinas, Terapia celular
Idioma
Português
