Eferocitose e resposta imune celular na infecção pelo Zika vírus
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Data
2024-10-11
Autores
Supervisor
Medeiros, Alexandra Ivo 
Coorientador
Pós-graduação
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Relatório de pós-doc
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
A infecção por ZIKV provoca intensa morte celular por apoptose em células-tronco humanas precursoras de células neurais, e a indução de apoptose nessas células parece ser dependente da ativação do receptor Toll-like-3 (TLR3) e caspase-3. Esses achados indicam que o ZIKV é altamente neurotrópico e atinge o sistema nervoso central após a infecção, o que implica que o vírus pode ser prejudicial, tanto no adulto, quanto durante o desenvolvimento cérebro nos fetos. A fagocitose de corpos apoptóticos, processo denominado eferocitose, é realizada tanto por fagócitos profissionais, como os macrófagos e células dendríticas (DCs), como por fagócitos não profissionais, como as células epiteliais. Durante o processo de degradação do corpo apoptótico, as DCs podem apresentar peptídeos, via MHC-II, oriundos tanto do patógeno, quanto de peptídeos próprios, provenientes das células apoptóticas infectadas. A apresentação desses peptídeos próprios por DCs, mediante a eferocitose de células apoptóticas, torna essas células permissivas em induzir a ativação de clones autorreativos e, aumenta as chances de desencadear uma doença autoimune. Um dos protocolos mais utilizados para o reconhecimento de peptídeos específicos é através da expressão de proteínas heterólogas ao organismo humano, cuja sequência seja expressa constitutivamente na célula, mimetizando a expressão de um antígeno próprio. A ovalbumina (OVA) é a proteína mais abundante na clara no ovo e tem sido amplamente utilizada em pesquisas como um modelo de antígeno para estudos de imunização e vacinação. Assim, o objetivo deste trabalho foi gerar um reagente contendo a sequência codificadora de OVA para expressão em neuroblastoma a fim de avaliar posteriormente a resposta autoimune pela ativação de receptores específicos para a proteína. Desta forma, o presente relatório descreve a obtenção do DNA recombinante contendo a sequência codificadora de OVA em um plasmídeo para integração ao genoma de mamífero, reagente fundamental para a modificação genética das células de neuroblastoma e avaliação da autorreatividade devida à infecção por ZIKV. O vetor de transferência foi obtido com sucesso e purificado em quantidade suficiente para a transfecção e transdução das células de HEK293 para avaliação do MOI e das células de neuroblastoma.
Resumo (inglês)
The ZIKV infection promotes cellular death by apoptosis in human stem cells precursor of neural cells and the induction of apoptosis seems to be dependent of Toll-like-3 receptor (TLR3) and caspase-3. These findings indicate that ZIKV is highly neurotropic and reaches the central neural system after infection, implicating that the virus could damage adults or fetus. The phagocytosis of apoptotic bodies is a process called efferocytosis and it is done by professional phagocytes, as macrophages and dendritic cells (DCs) or non-professional cells as epithelial. During apoptotic body degradation, DCs could present peptides by MHC-II. Those peptides could be originated by the pathogen or the infected apoptotic cell. The presentation of self-peptides by DCs by the efferocytosis process, make those cells permissive to induce the activation of self-reactive clones, increasing the chance of developing an autoimmune response. One of the protocols used to recognize specific peptides is by the expression of an heterologous protein which sequence is constitutively expressed, mimetizing the expression of a self-peptide. Ovalbumin is an abundant protein in eggs and is widely used in research as an antigen model for immunization and vaccination studies. Therefore, the objective of this work was to develop one reagent harboring the OVA coding sequence for expression in neuroblastome in order to evaluate the autoimmune response by activation of specific receptors to the protein. In consequence, the presented report described the recombinant DNA obtained with OVA coding sequence in a plasmid for integrating in mammal genome, which is the bases for genetic modification of neuroblastoma cells, enabling autoreactive responses evaluation due to ZIKV infection. The transfer vector was successfully obtained and purified in quantity to transfect and transduce HEK293 (MOI evaluation) and neuroblastoma cells.
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português