Avaliações histológica, imuno-histoquímica, biomecânica e de molhabilidade da membrana de fibrina rica em plaquetas e leucócitos de cães

Abstract

O objetivo do estudo foi realizar análises histológica, imuno-histoquímica, biomecânica e de molhabilidade de membranas de fibrina rica em plaquetas e leucócitos (L-PRF), obtidas do sangue de 10 cães hígidos da raça labrador retriever. Coletou-se amostra sanguínea da veia jugular externa com uso de tubo à vácuo sem anticoagulante, que foi imediatamente centrifugado no protocolo de 400g por 12 minutos, empregando centrífuga especializada. Removeu-se o coágulo da L-PRF do tubo e com auxílio de espátula foi raspado o coágulo de hemácias resguardando o “buffy coat”. A membrana da L-PRF foi produzida usando caixa de PRF. Na análise histológica as três porções da membrana foram identificadas, sendo a primeira composta principalmente por eritrócitos, com baixa densidade de leucócitos interpostos entre os mesmos; a segunda formada por leucócitos, predominantemente neutrófilos; e a terceira camada, de aspecto acidofílico, composta pela rede de fibrina. Na imuno-histoquímica todas as amostras apresentaram marcação positiva para VEGF e PDGF, tanto no componente celular, como na malha de fibrina, porém com diferentes intensidades. As avaliações biomecânicas e de molhabilidade foram efetuadas em dois momentos. As membranas L-PRF de 30 minutos suportaram o dobro da tensão máxima em tração quando comparadas com as de 3 horas. A molhabilidade das membranas de 30 minutos foi estatisticamente maior que as de 3 horas. Conclui-se que o protocolo de centrifugação empregado permitiu o desenvolvimento da membrana da L-PRF em cães, comprovado pelas análises histológicas e imuno-histoquímicas, mostrando que o tempo pode influenciar na resistência mecânica e de molhabilidade.

This study aimed to perform histological, immunohistochemical, biomechanical, and wettability assessments of Leukocyte- and Platelet-Rich fibrin (L-PRF) membranes, obtained from the blood of healthy dogs. Ten client-owned Labrador retriever dogs were enrolled. Blood samples were obtained from the external jugular vein with a vacuum tube without anticoagulant, which was immediately centrifuged at 400 g for 12 minutes in a dedicated centrifuge. The L-PRF clot was removed from the tube and the red clot was released from the buffy coat with a spatula. The membrane was produced using a PRF box. Histological examination identified the three portions of the L-PRF membranes. The first portion was composed mainly of red blood cells with the presence of a low number of leukocytes among them. The second portion was composed of white blood cells, mainly neutrophils. The third portion composed of the fibrin network was characterized by an acidophilic stain. The immunohistochemical analysis showed that VEGF and PDGF were expressed in all samples at different intensities, both in cellular components and fibrin mesh. The biomechanical and wettability assessments were done in membranes 30 minutes and three hours after production. The 30-minute L-PRF membranes supported two times the maximum stress in tension testing compared to 3-hour L-PRF membranes. The wettability of the 30-minute sample membranes was statistically higher than the 3-hour sample membranes. In conclusion, the centrifugation protocol allowed producing L-PRF membrane in dogs, based on histological and immunohistochemical analysis; the mechanical resistance and wettability of the L-PRF membrane suffered the influence of the time.