Efeitos de diferentes concentrações de melatonina na maturação oocitária e/ou cultivo embrionário sobre as taxas de produção de embriões bovinos cultivados in vitro
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Data
2024-10-11
Autores
Orientador
Membrive, Claudia Maria Bertan 
Coorientador
Mendes, Adriano Felipe
Pós-graduação
Curso de graduação
Dracena - FCAT - Zootecnia
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
A manipulação de oócitos e embriões bovinos em condições laboratoriais promove o estresse oxidativo dessas estruturas limitando o sucesso da produção in vitro de embriões (PIVE). Diante disso, a melatonina, um hormônio com ação antioxidante, apresenta grande potencial de utilização na PIVE. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da melatonina em concentrações de 0,01, 10 e 10000 nM (Sigma Aldrich, M5250) durante a maturação oocitária in vitro (MIV) e/ou cultivo embrionário in vitro (CIV) sobre a produção e qualidade embrionária. No Experimento 1, as concentrações de 0 (controle), 0,01, 10 e 10000 nM foram aplicadas exclusivamente durante a MIV, por 24 horas. No Experimento 2, as mesmas concentrações foram aplicadas exclusivamente durante o CIV, ao longo dos 9 dias. No Experimento 3, as concentrações foram aplicadas tanto na MIV quanto no CIV. As taxas de produção embrionária foram avaliadas nos dias 3 (taxa de clivagem), 7 (taxa de blastocisto) e 9 (taxa de eclosão), considerando a fertilização in vitro (FIV) como dia 0. No Experimento 1, a qualidade dos embriões (D9) foi avaliada por RT-qPCR, sendo mensurada a expressão dos genes OCT4 (POU class 5 homeobox 1), SOD2 (superoxide dismutase 2), GPX1 (glutathione peroxidase 1) e BAX (BCL2 associated X). Os dados foram submetidos a análise de variância, seguida da aplicação decontrastes entre os grupos com nível de significância de 5%. A taxa de clivagem não variou nos três experimentos. No Experimento 1, observou-se tendência para maior número de blastocistos eclodidos (P = 0,0686) e totais (P = 0,0892) no grupo com 10000 nM em comparação ao grupo com 0,01 nM. No D9, houve um aumento no número de blastocistos totais (P = 0,0216) e uma tendência para um maior número de blastocistos eclodidos (P = 0,0741) no grupo com 10000 nM em comparação ao grupo com 0,01 nM. Não foram observadas diferenças na abundância dos transcritos dos genes avaliados. Nos Experimentos 2 e 3, não foram encontradas diferenças significativas na produção embrionária. Em conclusão, a adição demelatonina na MIV não altera a expressão dos transcritos OCT4, SOD2, GPX1 e BAX. Adicionalmente, 10000 nM melatonina exclusivamente na MIV mostra tendência para melhores taxas de produção embrionária, sendo essa concentração mais favorável que 0,01 nM.
Resumo (inglês)
The manipulation of bovine oocytes and embryos in laboratory conditions causes oxidative stress of these structures, limiting the success of in vitro embryo production (IVEP). Due to it, the melatonin, a hormone with antioxidant action, has great potential for its use in IVP. The aim of this study was to evaluate the effects of melatonin at concentrations of 0,01, 10 and 10000 nM (Sigma Aldrich, M5250) during in vitro oocyte maturation (IVM) and/or in vitro embryo culture (IVC) on embryo production and quality. In Experiment 1, the concentrations of 0 (control), 0,01, 10 and 10000 nM were applied exclusively during the IVM, for 24 hours. In Experiment 2, the same concentrations were applied exclusively during the IVC throughout the 9 days. In Experiment 3, the concentrations were applied during both IVM and IVC. The Embryo production rates were assessed on days 3 (cleavage rate), 7 (blastocyst rate) and 9 (hatching rate), considering in the vitro fertilization (IVF) as day 0. In Experiment 1, the embryo quality (D9) was assessed by RT-qPCR, measuring the expression of the genes OCT4 (POU class 5 homeobox 1), SOD2 (superoxide dismutase 2), GPX1 (glutathione peroxidase 1) and BAX (BCL2 associated X). The data were submitted to analysis of variance, followed by the application of contrast into the groups, with a significance level of 5%. The cleavage rate did not vary across the three experiments. In Experiment 1, a tendency towards a higher number of both hatched blastocysts (P = 0,0686) and total blastocysts (P = 0,0892) was observed in the 10000 nM group compared to the 0,01 nM group. On D9, there was an increase in the number of total blastocysts (P = 0,0216) and tendency towards a greater number of hatched blastocysts (P = 0,0741) in the 10000 nM group compared to the 0,01 nM group. No differences were observed in the abundance of the transcripts of the genes evaluated. In Experiments 2 and 3, no significant differences were found in embryo production. In conclusion, the addition of melatonin to IVM does not alter the expression of OCT4, SOD2, GPX1 and BAX transcripts. Additionally, 10000 nM melatonin exclusively in IVM shows a trend towards better embryonic production rates, and this concentration is more favorable than 0.01 nM.
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português
Como citar
SILVA, Ana Laura. Efeitos de diferentes concentrações de melatonina na maturação oocitária e/ou cultivo embrionário sobre as taxas de produção de embriões bovinos cultivados in vitro. 2024. 78 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Zootecnia) - Universidade Estadual Paulista (UNESP), Faculdade de Ciências Agrárias e Tecnológicas, Dracena, 2024.