Detecção e caracterização molecular de agentes anaplasmataceae, Bartonella spp. e micoplasmas hemotrópicos em tatus e tamanduás no sudeste e centro-oeste do brasil

Abstract

Os tatus e tamanduás apresentam uma ampla variedade de interações com diversos agentes patogênicos e ectoparasitos que, aliadas às suas características fisiológicas e ecológicas, contribuem para que se tornem potenciais hospedeiros para uma ampla variedade de agentes patogênicos. Entretanto, poucos estudos investigaram a ocorrência e diversidade de agentes transmitidos por vetores neste grupo de animais. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência e identidade molecular de Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Bartonella spp. e micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas) em tatus e tamanduás de vida-livre amostrados nas regiões sudeste e centro-oeste do Brasil. Para tal, foram analisadas 167 amostras biológicas (139 de sangue e 28 de baço) de mamíferos Xenarthra amostrados nos estados de São Paulo e Mato Grosso do Sul: 48 de tatu-peba (Euphractus sexcinctus), 29 de tatu-canastra (Priodontes maximus), 4 de tatu-galinha (Dasypus novemcinctus), 1 de tatu-de-rabo-mole (Cabassous unicinctus), 79 de tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) e 6 de tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla). Foram realizados ensaios de PCR de triagem para Ehrlichia spp. com base no gene dsb, nested PCR para Anaplasma spp. e PCR para micoplasmas hemotrópicos com base no gene 16S rRNA, e de qPCR para Bartonella spp. com base na região intergênica 16-23S rRNA (ITS). As amostras positivas foram adicionalmente submetidas a ensaios de PCR direcionados a diferentes marcadores moleculares para caracterização molecular. 1/48 (0,59%) amostra de sangue de E. sexcintus foi positiva para Anaplasma spp. e 1/79 (0,59%) amostra de sangue de M. tridactyla para Ehrlichia spp. A sequência 16S rRNA de Anaplasma sp. detectada em E. sexcintus posicionou-se no mesmo clado de ‘Candidatus Anaplasma brasiliensis’, previamente detectado em T. tetradactyla. A sequência dsb de Ehrlichia sp. detectada em M. tridactyla posicionou-se no mesmo clado de Ehrlichia minasensis. Na PCR para hemoplasmas, 31/46 (64,5%) E. sexcinctus, 9/29 (65,5%) P. maximus, 2/4 (50%) D. novemcinctus, 33/79 (41,7%) M. tridactyla e 2/6 (33,3%) T. tetradactyla mostraram-se positivos. As sequências 16S rRNA e 23S rRNA de hemoplasmas detectadas em E. sexcintus foram posicionadas no mesmo clado que ‘Candidatus Mycoplasma haematomaximus’ previamente detectado em P. maximus no Brasil. Alta positividade foi também verificada para Bartonella spp. 23/48 (47,9%) E. sexcinctus, 1/4 (25%) D. novemcinctus, 9/29 (31%) P. maximus, 21/79 (26,5%) M. tridactyla, e 3/6 (50%) T. tetradactyla. As sequências ftsZ de Bartonella sp. detectadas em E. sexcintus posicionaram-se juntamente com ‘Candidatus Bartonella washoensis subsp. brasiliensis’ previamente detectada em tatus-peba no Brasil. Os achados do presente estudo reforçam a ocorrência de ‘Candidatus Anaplasma brasiliensis’ e ‘Candidatus Bartonella washoensis subsp. brasiliensis’ em tatus, e E. minasensis em tamanduás. Trata-se do primeiro relato de ‘Candidatus Mycoplasma haematomaximus’, hemoplasma anteriormente descrito em tatus-canastra, em tatuspeba.

Armadillos and anteaters exhibit a wide range of interactions with various pathogens and ectoparasites, which, combined with their physiological and ecological characteristics, contribute to their potential as hosts for a broad array of pathogens. However, there has been limited research into the occurrence and diversity of vector-borne agents within this group of animals. The present study aimed to investigate the occurrence and molecular identity of Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Bartonella spp. and hemotropic mycoplasmas (hemoplasmas) in free-ranging armadillos and anteaters sampled in the southeast and central-west regions of Brazil. To this purpose, 167 biological samples (139 blood and 28 spleen) from Xenarthra mammals sampled in the states of São Paulo and Mato Grosso do Sul were analyzed: 48 from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus), 29 from giant armadillos (Priodontes maximus), 4 from nine-banded armadillos (Dasypus novemcinctus), 1 from naked-tailed armadillo (Cabassous unicinctus), 79 from giant anteaters (Myrmecophaga tridactyla) and 6 from southern tamanduas (Tamandua tetradactyla). Screening PCR assays were performed for Ehrlichia spp. based on the dsb gene, nested PCR for Anaplasma spp. and PCR for hemotropic mycoplasmas based on the 16S rRNA gene, and qPCR for Bartonella spp. based on the 16-23S rRNA intergenic region (ITS). The positive samples were additionally subjected to PCR assays targeting different molecular markers for molecular characterization. As a result, 1/48 (0.59%) blood sample from E. sexcintus was positive for Anaplasma spp., and 1/79 (0.59%) blood sample from M. tridactyla was positive for Ehrlichia spp. The 16S rRNA sequence of Anaplasma sp. detected in E. sexcintus clustered within the same clade as 'Candidatus Anaplasma brasiliensis', previously detected in T. tetradactyla. The dsb sequence of Ehrlichia sp. detected in M. tridactyla clustered within the same clade as Ehrlichia minasensis. In the PCR tests for hemoplasmas, 31/46 (64.5%) E. sexcinctus, 9/29 (65.5%) P. maximus, 2/4 (50%) D. novemcinctus, 33/79 (41.7%) M. tridactyla, and 2/6 (33.3%) T. tetradactyla tested positive. The 16S rRNA and 23S rRNA sequences of hemoplasmas found in E. sexcinctus clustered within the same clade as 'Candidatus Mycoplasma haematomaximus', which was previously detected in P. maximus in Brazil. High positivity rates were also observed for Bartonella spp., with 23/48 (47.9%) E. sexcinctus, 1/4 (25%) D. novemcinctus, 9/29 (31%) P. maximus, 21/79 (26.5%) M. tridactyla, and 3/6 (50%) T. tetradactyla showing positive results. The ftsZ sequences of Bartonella sp. detected in E. sexcinctus clustered with ' Candidatus Bartonella washoensis subsp. brasiliensis', previously identified in Tatus peba in Brazil. These findings reinforce the presence of 'Candidatus Anaplasma brasiliensis' and 'Candidatus Bartonella washoensis subsp. brasiliensis' in armadillos, and Ehrlichia minasensis in anteaters. This is the first report of ‘Candidatus Mycoplasma haematomaximus’, a hemoplasma previously described in giant armadillos, in six-banded armadillos.