Impacto da eferocitose de células infectadas pelo Zika vírus na ativação de células dendríticas e diferenciação de clones de linfócitos T autorreativos
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Data
Autores
Orientador
Medeiros, Alexandra Ivo de 
Coorientador
Pós-graduação
Biociências e Biotecnologia Aplicadas à Farmácia - FCF
Curso de graduação
Título da Revista
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Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
Prévios estudos demonstram que infecções virais, podem desencadear doenças autoimunes mediante a quebra da tolerância imunológica e ativação de células TCD4+ autorreativas. A infecção por Zika vírus (ZIKV) pode causar uma intensa resposta imune levando a morte de células neuronais resultando em neuropatologias, como a síndrome de Guillain-Barré (SGB). Estudos têm demonstrado que a eferocitose de células apoptóticas infectadas (iAC) por células dendríticas (DCs) pode desempenhar um papel importante tanto na resolução da infecção, como no desenvolvimento de clones autorreativos. Portanto, nesse estudo, nós hipotetizamos que a infecção por ZIKV resulta na morte celular, e a eferocitose dessas células apoptóticas infectadas poderia induzir a ativação de DCs e de células T CD4+ autorreativas. Incialmente estabelecemos a infecção de ZIKV em uma linhagem celular de neuroblastoma, SH-SY5Y. A taxa de infecção obtida após 48h de infecção em MOI de 1 foi de aproximadamente 35% de células positivas para o anticorpo anti-4G2. Diferente do esperado, a infecção não alterou significativamente a porcentagem de apoptose, no entanto, após radiação com UV-C (5mJ) obtivemos ~30% das células positivas para caspase 3-clivada. A eferocitose de células apoptóticas contendo uma baixa taxa de infecção (Low rate ZIKV-iAC, ~ 27%) não resultou em diferenças significativas na expressão de marcadores de ativação celular, como CD86, MHC-II e PD-L1 em DCs, quando comparado as condições DC+AC ou DC+Meio. Confirmando o perfil tolerogênico dessas células, a eferocitose de Low rate ZIKV-iAC não foi capaz de induzir a proliferação e ativação de clones autorreativos, como demonstrado pelos ensaios utilizando linfócitos de animais OT-II. Na tentativa de avaliar se a taxa de infeção poderia influenciar o perfil de ativação de DCs durante a eferocitose, realizamos o isolamento apenas das células apoptóticas infectadas com ZIKV, por sorting, resultando em um enriquecimento de ~86% de infectadas com ZIKV (High rate ZIKV-iAC, ~86%). A eferocitose dessas células contento uma alta taxa de infecção parece quebrar o perfil tolerogênico dessas DCs, mediante ao aumento da expressão de MHC-II e CD86, e a diminuição de PDL-1 em DCs. Além disso, apenas a eferocitose de High rate ZIKV-iAC foi hábil aumentar a expressão de Ifn1, Ifn2, e Stat1, quando comparado às condições BMDC, BMDC+AC ou BMDC+Low rate ZIKV-iAC. A diferenciação de linfócitos T CD4+ na presença de meio condicionado (CM) oriundo de DCs cultivadas na presença de high rate ZIKV-iAC, sugere um perfil de diferenciação em Th17. Portanto, a taxa de infecção parece ser determinante para a que a eferocitose possa impactar na maturação de BMDCs e na ativação de linfócitos T CD4+, o que poderia favorecer a imunidade contra o patógeno, bem como o desenvolvimento de clones autorreativos.
Resumo (inglês)
Previous studies have shown that viral infections can trigger autoimmune diseases through the breakdown of immune tolerance and the activation of autoreactive CD4+ T cells. Zika virus (ZIKV) infection can elicit a strong immune response, leading to neuronal cell death and resulting in neuropathologies, such as Guillain-Barré syndrome (GBS). Studies have demonstrated that the efferocytosis of infected apoptotic cells (iAC) by dendritic cells (DCs) may play a significant role both in resolving the infection and in the development of autoreactive clones. Therefore, in this study, we hypothesized that ZIKV infection results in cell death, and the efferocytosis of these infected apoptotic cells could induce the activation of DCs and autoreactive CD4+ T cells. Initially, we established ZIKV infection in a neuroblastoma cell line, SH-SY5Y. The infection rate obtained after 48 hours of infection at an MOI of 1 was approximately 35% of cells positive for the anti-4G2 antibody. Contrary to expectations, the infection did not significantly alter the percentage of apoptosis; however, after UV-C irradiation (5mJ), we observed 30% of cells positive for cleaved caspase-3. The efferocytosis of apoptotic cells with a low infection rate (Low rate ZIKV-iAC, 35% iACs) did not result in significant differences in the expression of cellular activation markers, such as CD86, MHC-II, and PD-L1 in DCs, when compared to the DC+AC or DC+Medium conditions. Confirming the tolerogenic profile of these cells, the efferocytosis of Low rate ZIKV-iAC was not able to induce the proliferation and activation of autoreactive clones, as demonstrated by assays using lymphocytes from OT-II mice. In an attempt to assess whether the infection rate could influence the activation profile of DCs during efferocytosis, we isolated only the ZIKV-infected apoptotic cells through sorting, resulting in an enrichment of ~86% ZIKV-infected cells (High rate ZIKV-iAC, ~86%). The efferocytosis of these cells with a high infection rate appears to disrupt the tolerogenic profile of these DCs, as evidenced by the increased expression of MHC-II and CD86, and the decreased expression of PDL-1 in DCs. Furthermore, only the efferocytosis of High rate ZIKV-iAC was capable of upregulating the expression of Ifn1, Ifn2, and Stat1, compared to the BMDC, BMDC+AC, or BMDC+Low rate ZIKV-iAC conditions. The differentiation of CD4+ T lymphocytes in the presence of conditioned medium (CM) from DCs cultured with high rate ZIKV-iAC suggests a Th17 differentiation profile. Therefore, the infection rate appears to be a determinant for efferocytosis to impact BMDC maturation and CD4+ T lymphocyte activation, which could favor immunity against the pathogen, as well the development of autoreactive T cells.
Descrição
Palavras-chave
Apoptose, Eferocitose, Zika vírus, Células dendríticas, Autorreatividade, Linfócitos T CD4
Idioma
Português
Citação
Raimundo, Breno Vilas Boas. Impacto da eferocitose de células infectadas pelo Zika vírus na ativação de células dendríticas e diferenciação de clones de linfócitos T autorreativos. Orientadora: Alexandra Ivo de Medeiros. 2024. 89p. Tese (Doutorado em Ciências na área de Imunologia) - Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Araraquara, 2024.
