Biotransformação de arilacetonitrilas α-substituídas, blocos construtores para síntese de drogas com atividade antiparasitária

Abstract

O presente estudo avaliou o potencial de micro-organismos isolados da diversidade brasileira quanto à presença das enzimas nitrila hidratase (NHase)/amidase e/ou nitrilase (Nase), e sua capacidade de converter mandelonitrila em ácido mandélico e/ou mandelamida. Os micro-organismos foram isolados a partir de amostras de solo obtidas de duas localidades distintas. A primeira delas foi uma região da UNESP - Rio Claro que faz divisa com a FEENA (Floresta Estadual Edmundo Navarro de Andrade), e a segunda localidade foi a Fecularia Plaza, uma usina de beneficiamento de mandioca na cidade de Santa Maria da Serra. Após o isolamento dos micro-organismos, os mesmos foram induzidos a produzirem as enzimas de interesse. Para avaliação do potencial enzimático dos micro-organismos selecionados, foi utilizado um ensaio colorimétrico em formato miniaturizado baseado em alterações de pH. Este ensaio foi uma modificação de um ensaio anterior, diferindo-se deste último pela presença do inibidor de amidase DEPA (dietilaminofosforamida), capaz de distinguir entre as rotas metabólicas da Nase e NHase/amidase. Foram avaliados 8 micro-organismos distintos por ensaio. Após incubação, foi observada a mudança de coloração do meio reacional pela leitura das placas por inspeção visual, com alteração da coloração azul (inicial) para verde claro ou amarelo, por exemplo. A partir deste ensaio, foi possível a seleção de 9 micro-organismos promissores para prosseguimento dos estudos. Foram obtidos alguns falsos-positivos, porém, estes foram identificados através de análises realizadas por GC-MS. Os 9 micro-organismos selecionados foram, então, utilizados em reações de transformação da mandelonitrila em escala um pouco maior (microtubos de 1,5 mL) comparada àquelas realizadas em microplaca de 96 poços (200 l). Decorrido o tempo de reação, foram realizadas extrações da fase aquosa de cada...