Publicação: Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR
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Data
2023-06-23
Autores
Orientador
Berchieri Junior, Angelo
Coorientador
Saraiva, Mauro de Mesquista Souza
Pós-graduação
Curso de graduação
Ciências Biológicas - fc
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
A técnica de qPCR, quantifica em tempo real baixas concentrações de ácidos nucleicos, por meio de fluorescência, presentes em amostras biológicas obtidas de diversas fontes. Trata-se de uma técnica padrão-ouro em pesquisas de expressão gênica e em diagnósticos laboratoriais. O presente trabalho tem como intuito padronizar a técnica de RT-qPCR, responsável pela quantificação da expressão gênica. Foram utilizadas duas estirpes (mutante e selvagem) de Salmonella Enteritidis em aves de um dia de vida que, posteriormente, foram eutanasiadas para a colheita de baço e tonsila cecal. Foi feita a extração de RNA dos tecidos, seguido de transcrição reversa para a execução das reações de RT-qPCR. A curva de normalização foi realizada para quatro genes de referência e, foi selecionado o gene 28S como o mais estável. Alguns detalhes como outros métodos de assepsia dos materiais para a extração de RNA e no momento do preparo das reações demonstraram pequenas diferenças e, consequentemente, contribuíram no êxito da padronização.
Resumo (inglês)
The qPCR technique quantifies extremely low
amounts of nucleic acids in real-time, through
fluorescence, present in biological samples obtained
from different sources. It is considered a gold standard
technique in gene expression research and laboratory
diagnostics. The objective of the current work was to
standardize the RT-qPCR technique, responsible for
the quantification of gene expression. Two strains
(mutant and wild) of Salmonella Enteritidis were used
in one-day-old chicken, which was later euthanized for
spleen and cecal tonsil collection. RNA extraction of
tissues and reverse transcription were performed to
the RT-qPCR reactions. A normalization curve was
performed for four reference genes, and 28S gene
was selected as the most stable. Some details, such
as other methods of asepsis of the materials for RNA
extraction and the time of preparation of the reactions,
made minor differences that contributed to the
success of the standardization.
Descrição
Palavras-chave
Idioma
Português
