Publicação: Estudos da interação patógeno-hospedeiro de biofilmes de Histoplasma capsulatum mediada por Hsp60-CR3 em modelo de tecido pulmonar humano funcional
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Data
Autores
Orientador
Almeida, Ana Marisa Fusco 
Coorientador
Silva, Samanta de Matos
Pós-graduação
Curso de graduação
Araraquara - FCF - Farmácia
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
A histoplasmose é uma infecção fúngica pulmonar e sistêmica causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum que afeta milhares de pessoas anualmente, sendo uma Infecção Fúngica Invasiva (IFI) de grande relevância mundial e que tem avançado em regiões do globo não antes relatada. Diversos mecanismos estão relacionados com o processo de estabelecimento e desenvolvimento da infecção, dentre os fatores importantes para a patogênese da doença destacam-se a adesão celular mediada com Hsp60/CR3 e, embora ainda não relatado na prática clínica, a capacidade de formação de biofilmes. Acredita-se que a interação patógeno-hospedeiro de biofilmes ocorre diferencialmente quando comparado à infecção por leveduras de H. capsulatum, sendo os biofilmes capazes de ativar simultaneamente diferentes vias de interação ao mesmo tempo que promovem a rápida fagocitose, não tendo a via Hsp-60/CR3 como a principal, como demonstrado em leveduras. Dessa forma, o objetivo desse projeto é estudar a influência da proteína Hsp60 em biofilmes de H. capsulatum, e seu papel durante a interação biofilme-hospedeiro em modelo tridimensional de tecido pulmonar humano, caracterizando a interação mediada por essa proteína no processo infectivo, a partir do bloqueio da Hsp60 com anticorpo monoclonal mAb (76B) seguido da infecção de tecido pulmonar humano tridimensional in vitro e avaliação a expressão de genes diferencialmente expressos por biofilmes do fungo e genes do hospedeiro importantes na interação patógeno-hospedeiro por RT-qPCR. . Os resultados destacam que o modelo 3D permitiu uma simulação realista da interação patógeno-hospedeiro, refletindo aspectos in vivo e oferecendo uma nova perspectiva para a investigação de infecções fúngicas. A análise de leveduras derivadas de biofilmes através de imunofluorescência, em comparação com células planctônicas, indicou uma distribuição diferencial da proteína Hsp60, concentrada em áreas específicas de adesão celular. Nos ensaios de infecção, a presença de biofilmes de H. capsulatum confirmou o papel fundamental dessa proteína na virulência do fungo.
Resumo (inglês)
Histoplasmosis is a pulmonary and systemic fungal infection caused by the dimorphic fungus *Histoplasma capsulatum*, affecting thousands of people annually. It is a highly relevant invasive fungal infection (IFI) worldwide, with reports of its spread to previously unaffected regions. Various mechanisms are involved in the establishment and development of the infection. Among the significant factors for disease pathogenesis, the Hsp60/CR3-mediated cell adhesion stands out, and although not yet reported in clinical practice, the fungus’s ability to form biofilms is noteworthy. It is believed that pathogen-host interaction in biofilms occurs differently compared to infections by H. capsulatum yeasts, as biofilms can activate multiple interaction pathways simultaneously while promoting rapid phagocytosis, without relying primarily on the Hsp60/CR3 pathway, as seen in yeasts. Thus, this project aims to study the influence of the Hsp60 protein in H. capsulatum biofilms and its role during biofilm-host interaction in a three-dimensional human lung tissue model. The project investigates the protein’s role in infection by blocking Hsp60 with the monoclonal antibody mAb (76B), followed by infection of in vitro 3D human lung tissue and analysis of differentially expressed genes in both fungal biofilms and host genes critical to pathogen-host interaction through RT-qPCR. The results indicate that the 3D model allowed for a realistic simulation of pathogen-host interaction, reflecting in vivo aspects and providing a new perspective for studying fungal infections. Immunofluorescence analysis of biofilm-derived yeasts, compared to planktonic cells, showed a differential distribution of Hsp60, concentrated in specific cell adhesion areas. Infection assays confirmed the fundamental role of this protein in the virulence of *H. capsulatum* biofilms.
Descrição
Palavras-chave
Histoplasma capsulatum, biofilmes, interação patógeno-hospedeiro, tecido pulmonar humano 3D, anticorpos monoclonais, biofilms, host-pathogen interaction, threedimensional cultures, monoclonal antibodies
Idioma
Português
