Avaliação de isolados bacterianos a partir de hamsters sírios (Mesocricetus auratus) antes e após a infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis
Carregando...
Data
2022-07-29
Autores
Orientador
Pinto, Mara Cristina 
Coorientador
Souza Neto, Jayme Augusto
Pós-graduação
Biociências e Biotecnologia Aplicadas à Farmácia - FCF
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Dissertação de mestrado
Direito de acesso
Acesso aberto
Resumo
Resumo (português)
Os flebotomíneos são insetos dípteros hematófagos, pertencentes à subfamília Phlebotominae, responsáveis por transmitirem o protozoário do gênero Leishmania (Trypanosomatidae), agente etiológico das leishmanioses. Estima-se que anualmente surjam entre 700.000 a 1 milhão de novos casos ao redor do mundo dessa parasitose. Durante o ano de 2020, a forma visceral da doença (LV) esteve presente em 10 países, totalizando 90% dos casos, dos quais 97% concentrados no Brasil. Em relação à leishmaniose tegumentar (LT), forma mais comum da doença, estima-se que 85% dos casos globais estejam concentrados em 10 países, dos quais, 15.484 são pertencentes ao Brasil. Uma das abordagens para o monitoramento e/ou controle dos insetos hematófagos é o estudo dos compostos orgânicos voláteis (COV) envolvidos na comunicação entre o hospedeiro e o inseto, denominados de cairomônios. Além disso, tem-se diferenças individuais na composição e concentração dos cairomônios o que, consequentemente, influencia na atratividade dos insetos. Estudos recentes têm apontado que hospedeiros infectados com parasitas, como Plasmodium spp e Leishmania infantum, podem ser mais atrativos para os insetos que os não infectados. Uma hipótese que explicaria tais alterações no padrão de voláteis emitidos é a microbiota da pele, que contém diversas espécies e cepas de bactérias capazes de produzir mais de 350 compostos voláteis diferentes. O presente projeto teve por objetivo avaliar as alterações causadas na microbiota das patas de hamsters sírios (Mesocricetus auratus) antes e após a infecção por L. amazonensis, assim como os voláteis produzidos por meio de isolamento e sequenciamento das bactérias cultiváveis, assim como os voláteis produzidos. Através da biblioteca Blastn (NCBI), foi possível identificar os gêneros das bactérias cultivadas (Bacillus e Staphylococcus), todas gram positivas. Além disso, foram realizados ensaios de microextração em fase sólida acoplado à cromatografia gasosa (CG-EM) para a identificação dos voláteis produzidos pelas bactérias cultivadas. Em relação aos compostos voláteis, foram identificados 46, com destaque para o ciclooctatetraeno, biomarcador para a bactéria Staphylococcus aureus e piridina-3-carboxilato de metila, volátil que indicou a presença de bactérias do gênero Mycobacterium, potencial agravadora das lesões leishmanióticas. Através do sequenciamento genético confirmou-se a presença dos gêneros Staphylococcus spp. e Bacillus spp. nos animais saudáveis e infectados, ambos pertencentes a classe Bacilli. O estudo demonstra, portanto, a associação existente entre a liberação de diferentes COV a partir de diferentes gêneros de bactérias. Além disso, destaca-se a presença frequente do gênero Staphylococcus na pele do hospedeiro, considerada uma bactéria oportunista, capaz de, ao adentrar o organismo do hospedeiro, criar biofilmes resistentes à ação de antibióticos. Deste modo, a identificação, o entendimento e a compreensão dos COV emitidos pela microbiota presente na pele de diferentes indivíduos se fazem necessárias, uma vez que podem servir como iscas atrativas passíveis de serem aplicadas no monitoramento ou controle destes insetos.
Resumo (português)
Sandflies are bloodsucking dipterous insects, belonging to the subfamily Phlebotominae, responsible for transmitting the protozoan of the genus Leishmania (Trypanosomatidae), the etiological agent of leishmaniasis. It is estimated that annually between 700,000 and 1 million new cases arise around the world. During 2020, the visceral form of the disease (VL) was present in 10 countries, totaling 90% of cases, of which 97% are concentrated in Brazil. Regarding cutaneous leishmaniasis (TL), the most common form of the disease, it is estimated that 85% of global cases are concentrated in 10 countries, of which 15,484 are in Brazil. One of the approaches for monitoring and/or controlling blood-sucking insects is the study of volatile organic compounds (VOCs) involved in the communication between the host and the insect, called kairomones. In addition, there are individual differences in the composition and concentration of kairomones which, consequently, influence the attractiveness of insects. Recent studies have shown that hosts infected with parasites, such as Plasmodium spp and Leishmania infantum, may be more attractive to insects than uninfected ones. One hypothesis that would explain such changes in the pattern of volatiles emitted is the skin microbiota, which contains several species and strains of bacteria capable of producing more than 350 different volatile compounds. The present project aimed to evaluate the changes caused in the species of bacteria in Mesocricetus auratus feet before and after infection by Leishmania amazonensis, through isolation and sequencing of cultivable bacteria. Through the Blastn library (NCBI), it was possible to identify the genera of the cultured bacteria (Bacillus and Staphylococcus), all gram positive. In addition, solid phase microextraction tests coupled with gas chromatography (GC-MS) were performed to identify the volatiles produced by the cultured bacteria. Regarding the compounds, 47 volatile compounds were identified, with emphasis on cyclooctatetraene, a biomarker for the bacterium Staphylococcus aureus and methyl pyridine-3-carboxylate, a volatile that indicated the presence of bacteria of the Mycobacterium genus, a potential aggravator of leishmaniasis lesions. Through genetic sequencing, the presence of Staphylococcus spp. and Bacillus spp. in healthy and infected animals, both belonging to the Bacilli class. The study therefore demonstrates the association between the release of different VOCs from different genera of bacteria. In addition, the frequent presence of the genus Staphylococcus in the host's skin is highlighted, considered an opportunistic bacteria, capable of, when entering the host's organism, creating biofilms resistant to the action of antibiotics. Thus, the identification, understanding and understanding of VOCs emitted by the microbiota present in the skin of different individuals are necessary, since they can serve as attractive baits that can be applied in the control of these insects.
Descrição
Idioma
Português